泥蚶血红蛋白克隆、表达与免疫相关性研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M090101062上上海海海海洋洋大大学学硕士学位论文硕士学位论文泥蚶血红蛋白克隆、表达与免疫题目：相关性研究Molecularcloning,expressionandimmune-relatedresearchonthe英文题目：hemoglobinfrombloodclamTegillarcagranosa专业：水产养殖研究方向：功能基因组学姓名：汪青指导教师：林志华二0一二年五月二十三日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人

2、在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复

3、制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文泥蚶血红蛋白克隆、表达与免疫相关性研究摘要泥蚶(Tegillarcagranosa)俗称血蚶、花蚶、粒蚶等，隶属于瓣鳃纲列齿目，蚶科，蚶属。是我国传统养殖贝类之一广泛分布于山东、浙江、福建、广东等地，浙江是国内泥蚶养殖面积和产量最大的省份。然而近年来养殖泥蚶病害死亡频发，深入开展泥蚶功能基因的研究，尤其是免疫相关基因及其机制研究并在此基础上寻找泥蚶疾病防治的有效方法

4、对泥蚶的健康养殖十分重要。对于贝类免疫系统来说，其血细胞在先天性免疫防御中起着重要的作用。周永灿和潘金培认为在贝类中参与免疫的主效因子是血细胞，由于贝类不具有特异性免疫，只有细胞和体液的非特异性免疫系统，因此，血细胞对贝类免疫来说至关重要，它是贝类体内抵御外来病原生物侵袭的主要“屏障”。刘世良等发现贝类血细胞的功能与维持体内各种生理环境的稳定性有密切关系，血细胞除具有营养、防御的功能，主要通过参与包埋，吞噬，结节形成，细胞凝块和伤口修复等过程起到免疫防御作用。这表明泥蚶、毛蚶等蚶科动物血红细胞与脊椎动物血液内的免疫细胞具有相

5、似的功能，承担了部分免疫功能。在分子水平方面，Jiang等研究发现人血红蛋白具有潜在类酚氧化酶活性，能有效杀灭金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)等细菌；Nedjar-Arroume等发现牛血红蛋白水解片段对藤黄微球菌A270(MicrococcusluteusA270)等具有抑制作用，说明哺乳动物血红蛋白具有一定的抗菌免疫作用。鲎(Limuluspolyphemus)、龙虾(Pacifastacusleniusculus)、章鱼(Octopu

6、svulgaris)和红皱岩螺(Rapanavenosa)等无脊椎动物的血细胞中，血蓝蛋白也具有酚氧化酶或类酚氧化酶活性，可以杀灭细菌。因此研究泥蚶血红蛋白对于泥蚶免疫防御机制的研究有重要的意义。首先，采用Hemacolor染料对泥蚶等5种水产动物血细胞涂片进行染色，利用光镜和扫描电镜两种方法对5种动物的血红细胞的表面结构和形态特征进行观察，以期对血红细胞形态差异及进化规律进行探讨。结果发现：泥蚶、毛蚶两种蚶科贝类血红细胞具有嗜酸性或嗜碱性颗粒，而鲫鱼、牛蛙、中华鳖3种水产脊椎动物则没有；从蚶科贝类到牛蛙，血红细胞直径不断增

7、大，而中华鳖血红细胞I上海海洋大学硕士学位论文直径则变小；血红细胞长宽比也符合这一变化趋势。泥蚶和毛蚶血红细胞表面有明显的波状褶皱和较深的且直径较大的凹陷；3种脊椎动物血红细胞表面也发现了直径较小的凹陷，但未发现皱褶的存在，且表面凹陷程度逐渐减弱。分析认为动物不断进化，其活动能力和生境也在变化，使得动物血红细胞发生相应的变化，以获得最大的气体交换效率与细胞稳定性。其次，本文通过RACE方法获得了泥蚶血红蛋白家族三种基因的cDNA全长并对其进行了序列的生物信息学分析，泥蚶血红蛋白Tg-HBI全长cDNA为748个碱基，其中开放

8、阅读框为441个碱基，编码147个氨基酸，泥蚶与贝类动物毛蚶、不等壳毛蚶HbI氨基酸序列同源性显著，一致度都为82%，但与其他动物一致度较低。Tg-HBIIA全长cDNA为731个碱基，其中开放阅读框为450个碱基，编码150个氨基酸，序列比对结果发现Tg-HBIIA的氨基酸序列与与毛蚶、