奥曲肽对实验性脑梗死大鼠脑保护作用及其机制的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文奥曲肽对实验性脑梗死大鼠脑保护作用及其机制的研究姓名：陈林玉申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：张祥建201203中文摘要奥曲肽对实验性脑梗死大鼠脑保护作用及其机制的研究摘要目的：脑血管病是导致人类残疾和死亡的主要原因之一。以缺血性脑卒中最为常见，约占所有脑血管病的80％～85％。脑缺血后继发性脑损伤是病情加重及影响预后的重要因素，但其机制十分复杂，包括炎症反应、氧化应激、Ca2+超载、线粒体功能障碍、细胞凋亡等等，其中氧化应激在缺血性脑损伤的发生发展上起关键性作用。脑缺血时，产

2、生大量的活性氧簇／活性氮簇，远远超过了内源性抗氧化系统的清除能力时，可使脑组织内许多内源性抗氧化酶活性降低，继而引起脑组织损伤。近年研究显示Nuclearfactorerythroid2relatedfactor2(Nrf2)／antioxidantresponseelement(ARE)信号通路是细胞抗氧化应激和防御亲电子物质攻击的主要机制之一。生理情况下，Nrf2与Keapl结合以非活性形式存在于胞浆内，氧化应激或亲电子物质攻击可以引起Nrf2／Keapl复合物关键部位的构象改变，二者解偶联，活化的Nrf

3、2转运入细胞核，在细胞核内Nrf2与ARE上相应位点结合，启动ARE调控的靶基因的表达。Nrf2／ARE通路激活后，可诱导多种解毒酶的表达，提高抗氧化物质的表达水平，清除活性氧和亲电子物质，增强细胞的抗氧化能力。最近动物实验和临床研究发现奥曲肽(Octreotide)对心肌梗死及扩张性心肌病有保护作用，并且可通过抗氧化机制保护肝脏、胰腺及视网膜等多个脏器的缺血再灌注损伤，对大鼠抑郁症状也有改善作用。但有关奥曲肽在脑梗死急性期的神经保护作用及其机制的研究很少。本实验成功建立了大鼠永久性大脑中动脉闭塞(perma

4、nentmiddlecerebralarteryocclusion，pMCAO)模型，并应用奥曲肽进行干预，观察奥曲肽对脑梗死的保护作用及其对Nrf2、II相酶血红素加氧酶HO．1(heineoxygenase一1)与脂质过氧化产物MDA(Malondiadehyde)的影响。方法：采用健康成年雄性Spmgue．Dawley大鼠，按照改良的Longa线栓法建立右侧pMCAO动物模型。实验动物随机分为假手术组(Sham)、对照组(MCAO)、奥曲肽低剂量组(MCAO+octreotide50／ag／kg，OCT

5、—L)、奥曲肽高剂量组(MCAO+octreotide100pg／kg，中文摘要OCT．H)。药物干预组动物于大脑中动脉闭塞后立即腹腔注射奥曲肽。Sham组和MCAO组于MCAO术后立即腹腔注射等容量生理盐水。并于术后24小时采用改良的Longa评分法对大鼠进行神经功能评分，2分．4分者纳入实验组。完毕后将大鼠断头处死，留取病变侧脑组织应用干湿重法测定脑含水量，用2％2，3，5．三苯基四唑氮红(triphenyltetrazoliumchloride，TTC)染色测定脑梗死体积，用免疫组织化学和蛋白印记法(W

6、esternbloting方法)分别测定Nrf2和HO．1的表达情况，采用试剂盒应用酶标仪检测大脑皮层梗塞灶丙二醛(Malondiadehyde，MDA)的含自里。结果：1Sham组未出现神经功能缺损，而MCAO组、奥曲肽低剂量组和奥曲肽高剂量组大鼠均出现不同程度的左侧肢体偏瘫。奥曲肽高剂量组的神经功能评分明显低于MCAO组，差异有统计学意义(P<0．05)。奥曲肽低剂量组与MCAO组相比，神经功能评分无明显差异。2Sham组右侧脑组织含水量为79．49％±0．40％，脑梗塞后脑组织含水量明显升高，MCAO组

7、病变侧脑组织含水量为85．314-0．93％。给予奥曲肽干预后，低剂量组和高剂量组病变侧脑组织含水量均明显降低，与MCAO组相比差异有统计学意义(MCAOgroupVS．OCT—Lgroup：85．314-O．93％VS．84．004-0．74％，尸<0．05；MCAOgroupVS．OCT-Hgroup：85．3l4-0．93％VS．82．934-1．00％，P<0．05)。病变对侧脑组织含水量无差异(户>0．05)。3Sham组无梗死灶。与MCAO组相比，奥曲肽高剂量组梗死体积明显减小，差异有统计学意义(

8、OCT．Hvs．MCAO：30．56％±4．01％VS．43．16％±2．32％，P0．05)。4脑缺血后奥曲肽高剂量组Nrf2及HO．1阳性细胞数增多，蛋白表达升高，与MCAO组相比差异具有统计学意义(户