木犀草对实验性脑缺血大鼠的脑保护作用及机制研究

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1、河北医科大学博士学位论文木犀草对实验性脑缺血大鼠的脑保护作用及机制研究姓名：乔会敏申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：张祥建201204中文摘要木犀草素对实验性脑缺血大鼠的脑保护作用及机制研究摘要脑血管病是我国居民死亡的第一原因和成人残疾的第一原因，以缺血性脑血管病最为常见，具有发病率高、病死率高、致残率高、复发率高、恢复缓慢的特点。缺血后继发性脑损伤是患者的病情加重和影响预后的重要原因。近年来，脑缺血后脑损伤的病理生理机制研究已取得了重大进步，然而，临床治疗效果却非常有限。脑梗死后的继发性脑损伤常导致

2、病情加重，主要包括氧化应激、炎症反应、凋亡、细胞内钙超载、细胞毒性作用、活性氧及自由基等，这几种因素之间相互作用、相互影响，构成复杂的调控网络，形成恶性循环，造成一系列病理级联反应，其中过度炎症反应、氧化应激和凋亡存在于脑梗死后坏死和缺血区域，成为导致继发损伤的主要原因。因此，抗氧化应激、减轻炎症损伤、抑制凋亡成为治疗脑梗死的主要途径之一。木犀草素(Luteolin)是一种天然黄酮类化合物，分子式为：C15HI006，存在于多种植物中，因最初是从木犀草科(Resedaceae)木犀草属草本植物木犀草(Rese

3、daodorataL)的叶、茎、枝中分离出而得名，具有多种药理活性，如抗炎、抗氧化、抑制凋亡、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、增强免疫功能等多种生物学作用，其毒副作用低，具有良好的临床应用潜力。本研究选用雄性Sprague．Dawley大鼠，应用改良Longa线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉阻塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型。在大鼠永久性大脑中动脉阻塞所致的脑缺血模型上观察脑缺血后TLR4，TLR5，P38MAPK，ERKl／2，claudin．5，Bcl．2和Bax的

4、表达，大脑皮层梗塞灶超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)与过氧化氢酶(Catalase，CAT)活性及丙二醛(Malondiadehyde，MDA)的含量。确定缺血后与炎症反应、氧化损伤及凋亡的关系，并选用黄酮类化合物木犀草素进行干预，评价干预前后梗死体积、脑含水量、神经功能缺损评分，以及木犀草素对TLR4，TLR5，P38MAPK，ERKl／2，claudin．5，Bcl-2和Bax的表达信号通路的影响，研究木犀草素对缺血损伤后的脑保护作中文摘要用机制进行初步探讨，并检测木犀草素

5、对氧化应激标志物SOD，CAT活性和MDA含量的影响。本研究分三部分，现将各部分内容概述如下。第一部分木犀草素对实验性脑缺血大鼠的抗氧化作用及机制研究目的：观察实验性大鼠脑缺血损伤后不同时间点梗死体积、脑含水量、神经功能缺损评分，claudin．5的表达变化以及SOD，CAT的活性和MDA的含量。研究木犀草素对脑缺血大鼠的脑保护作用。探讨木犀草素抗氧化作用的相关机制。方法：选用成年健康雄性Sprague．Dawley大鼠为研究对象，应用改良Longa线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉梗塞模型(MCAO)。实验l：观

6、察木犀草素的神经保护作用，梗塞后24h和72h分别观察神经功能缺损评分，脑含水量，梗塞体积。实验动物随机分为6组，假手术组(Sham)，假手术后腹腔注射等量生理盐水+I％DMSO；手术组(MCAO)，缺血术后腹腔注射等量生理盐水：溶剂对照组(MC+DM)，缺血术后腹腔注射等量生理盐水+I％DMSO；木犀草素小剂量组(Luteolin．L)，缺血术后腹腔注射木犀草素5mg／kg；木犀草素中剂量组(Luteolin．M)，缺血术后腹腔注射木犀草素10mg／kg；木犀草素大剂量组(Luteolin．H)，缺血术后腹

7、腔注射木犀草素25mg／kg。实验2：观察木犀草素的抗氧化功能。检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT)的活性，丙二醛(MDA)含量的变化情况。实验动物随机分为5组，假手术组(Sham)，手术组(MCAO)，溶剂对照组(MC+DM)，木犀草素中剂量组(Luteolin．M)，木犀草素大剂量组(Luteolin．H)。实验3：观察脑缺血后木犀草素对血脑屏障的影响。实验动物随机分为5组，假手术组(Sham)，手术组(MCAO)，溶剂对照组(MC+DM)，木犀草素中剂量组(Luteolin．M)，

8、木犀草素大剂量组(Luteolin．H)。各组取材前进行神经功能评分，干湿重法测定脑组织含水量，TTC染色评价脑梗死体积，分别用RT-qPCR的方法和Westernblot的方法检测缺血脑组织claudin．5mRNA和蛋白水平的变化。结果：lSham组无神经功能缺损，神经功能缺损评分为0分；MCAO组和MC+DM组在24h和72h神经功能缺损评分均较严重，Luteolin．L组在中文摘要24h和7