丁苯酞对家族性肌萎缩侧索硬化动物模型的神经保护作用

《丁苯酞对家族性肌萎缩侧索硬化动物模型的神经保护作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文丁苯酞对家族性肌萎缩侧索硬化动物模型的神经保护作用姓名：阴均涛申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：刘亚玲201203{≯中文摘要丁苯酞对家族性肌萎缩侧索硬化动物模型的神经保护作用摘要肌萎缩侧索硬化(AmyotrophiclateralsclerosisALS)又名运动神经元病(motorneurondiseaseMYO)或卢·格里格(LouGehrig)病，是一种致命性神经退行性疾病，选择性累及皮层、脑干和脊髓的运动神经元，临床表现为进行性加重的肌萎缩、无力和吞咽困难、饮食水发呛，最终因呼吸肌麻痹死亡。

2、90％的ALS为散发。

3、生(SALS)，10％的ALS为家族-

4、生(FALS)，其中约20％的FALS与Cu／Zn超氧化物歧化酶(SODl)基因突变有关。该病目前缺乏有效的治疗方法，病人的存活期一般为3．5年。尽管多年来有许多药物治疗研究，利鲁唑仍是惟一被FDA批准应用于治疗ALS的药物，但也只能有限的延长病人的生存期，因此寻找有效的治疗药物是非常必要的。尽管ALS发病机制不清，异常磷酸化的神经丝在脊髓前角运动神经元聚集被认为是ALS的重要病理特征之一。神经丝(NeurofilamentsNF)属于细胞骨架蛋白中的一种，根据其分子量

5、的不同分为三个不同的亚基蛋白，分别为神经丝重链(NF—H，200一kDa)、神经丝中链(NF．M，160．kDa)和神经丝轻链(NF．L，68．kDa)。其中NF．L在神经丝的组装方面起重要作用，NF。M和NF．H在维持神经丝的交联作用、轴突细胞骨架蛋白的稳定性、轴突直径大小和轴浆转运方面起重要作用。一般情况下，神经丝在神经元胞浆内以非磷酸化形式存在，而轴索内的神经丝以磷酸化形式存在，对维持轴索的直径等有重要作用。但是，异常磷酸化的神经丝的可以抑制神经丝蛋白的降解，导致其在核周异常聚集，最终引起神经元变性、死亡。丁苯酞(dl一3．n

6、．Butylphthalide)是芹菜(中国芹菜)种子的提取物。在2002年，首次被中国国家食品药品监督管理局批准应用于中风患者。实验证明丁苯酞具有减少氧化应激损伤和改善线粒体功能、抑制炎症反应和抗细胞凋亡的作用。最近，在阿尔茨海默病鼠模型中研究显示，丁苯酞能明显改善转基因鼠的认知功能。然而，目前关于丁苯酞在ALS治疗作用的相关研究报道很少。基于此，本实验观察丁苯酞对SODl．G93A转基因鼠的行为学影响，中文摘要：并进一步探讨可能的神经保护作用机制。本研究分为两部分：第一部分预防应用不同剂量的丁苯酞对家族性肌萎缩侧索硬化鼠模型的神

7、经保护作用目的：观察不同剂量的丁苯酞在发病前给药对SODl．G93A转基因鼠的行为学影响，并观察180mg／kg丁苯酞治疗组对SODl一G93A转基因鼠脊髓前角运动神经元神经丝重链的分布和表达水平的影响。方法：1动物分组及给药方法随机将48只携带SODl．G93A基因的小鼠分为四个实验组(n=12，雌性6只，雄性6只)：分别为低剂量治疗组(60mg／kg)、中剂量治疗组(120mg／kg)、高剂量治疗组(180mg／kg)和安慰剂组。丁苯酞(纯度>98％)由石药集团恩必普药业有限公司提供，三个治疗组分别以6mg／ml，12mg／ml

8、和18mg／ml的浓度将丁苯酞溶于玉米油中，安慰剂组给玉米油。丁苯酞和玉米油按10ml／kg／d的剂量给药。有12只(6只雌性和6只雄性)同窝阴性对照不接受任何治疗。SODl．G93A转基因鼠的给药时间为第42天。2行为学观察2．1发病时间和死亡时间的判定在83天进行一般状况评分，评分标准参考Vercelli等人研究的1．5分评分法：4分为发病时间，1分为死亡时间。5分：无运动功能障碍4分：将小鼠悬吊时出现后肢伸展异常或震颤3分：明显的后肢无力、步态异常2分：双后肢完全瘫痪，爬行仅靠前肢。1分：双后肢完全瘫痪，并且将小鼠仰卧后20s

9、内不能翻转。2．2旋转实验第10周开始转棒实验，实验前5天为转基因鼠的适应和学习阶段，以后每周测一次。转棒仪从1转／分开始，3分钟内达到30转，每只小鼠测三次，记录转棒时间最长的一次。3免疫组化10％水合氯醛将小鼠麻醉后，心脏灌注4％多聚甲醛固定20min，取2中文摘要小鼠脊髓腰段以4％多聚甲醛固定48h，振动切片30pro厚，免疫组织化学法观察髓前角神经元SMI．31和SMI．32的表达分布。4免疫印迹10％水合氯醛350mg／kg腹腔注射将小鼠麻醉后，新鲜取小鼠脊髓腰段，液氮速冻，．80。C储藏，提取总蛋白并用蛋白免疫印迹的方法

10、检测SODl．G93A转基因鼠腰髓SMI．3l蛋白表达。．5统计学方法我们采用SPSS13．0统计学软件对数据进行统计处理。各组数据用均数±标准误(x+SEM)表示。Kaplane．Meier(K．M)生存分析用于发病时间和生存时间的