ctgf和timp-1shrna对肝纤维化大鼠的影响

《ctgf和timp-1shrna对肝纤维化大鼠的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号：硕士学位论文CTGF和TIMP-1shRNA对肝纤维化大鼠的影响院（系）、所临床医学院研究生姓名舒福丽学科、专业内科学导师姓名张建军教授二Ο一二年五月目录CTGF和TIMP-1shRNA对肝纤维化大鼠的影1响………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………51.4材料与方法……………………………………………………81.5结果…………………………………

2、…………………………211.6讨论……………………………………………………………361.7结论……………………………………………………………421.8参考文献………………………………………………………431.9英汉缩略词对照表……………………………………………462致谢……………………………………………………………47肝纤维化的基因治疗（综述）………………………………483CTGF和TIMP-1shRNA对肝纤维化大鼠的影响摘要目的：研究CTGF和TIMP-1短发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）表达质粒重组体对

3、肝纤维化大鼠肝脏组织CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-IIImRNA基因表达及CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-III蛋白表达情况的影响，探索抗肝纤维化的机制，为肝纤维化的基因治疗探索新思路。方法：50只清洁级Wistar雄性大鼠被随机分为A组：双重RNA干扰组；B组：CTGF干扰组；C组：TIMP-1干扰组；D组：空载质粒治疗对照组；E组：模型对照组。每组大鼠腹腔注射1％DMN溶液，每次注射80μl／100g，每周连续注射3次，共3周。从第3周末开始尾静脉高压注射质粒干扰：A组注射psiRNA-GFP-Com（

4、含有CTGF和TIMP-1)，B组注射psiRNA-GFP-CTGF，C组：注射psiRNA-GFP-TIMP-1，D组注射空载质粒psiRNA-DUO-GFPzeo，E组：不注射。每2周注射1次，共4次。所有大鼠于实验第12周末处死，收集肝组织备用。各组肝脏组织中性甲醛固定后HE染色检测肝组织病理形态学改变，免疫组织化学检测各组肝组织中CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III蛋白表达情况。抽提各组肝脏组织RNA并逆转录成cDNA通过荧光定量PCR检测各组肝脏组织的CTGFmRNA、TIMP-1mRNA、Col-ImRNA

5、及Col-IIImRNA的表达情况。结果：与模型对照组（E组）相比，空载质粒治疗组（D组）CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-IIImRNA及肝脏组织中的CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III蛋白的表达均无差异，A组、B组、C组CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-IIImRNA的表达降低，肝脏组织中CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III蛋白的含量减少，其中双重RNA干扰组psiRNA-GFP–Com质粒转染（A组）肝纤维化大鼠后其对Col-ImRNA的表达及肝组织中I型胶原的蛋白含量的抑制程度

6、优于单干扰组质粒转染（P＜0.01或P＜0.05）。结论：1.针对CTGF和/或TIMP-1的RNA干扰可明显抑制肝纤维化大鼠的CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III基因表达及相关蛋白的分泌。2.双重联合RNA干扰作为抗肝纤维化基因治疗的方法，其治疗效果可能会优于单个RNA干扰。关键词：RNA干扰；结缔组织生长因子；基质金属蛋白酶组织抑制因子-1；短发夹RNA；转染；肝纤维化；大鼠；尾静脉高压注射；N-二甲基亚硝胺EffectofCTGFshRNAandTIMP-1shRNAonratswithhepaticfibros

7、isAbstract:Objectives:TostudytheeffectofCTGFshRNAandtheTIMP-1shRNAplasmidsontheexpressionofTIMP-1,CTGF,Col-IandCol-IIImRNAsandtheexpressionofCTGF,TIMP-1,Col-IandCol-IIIproteinsintheratswithhepaticfibrosis,andfuthertoexploretheprophylaxismechanismofshRNA,andtofindanewme

8、thodofgenetherapyofhepaticfibrosis.Methods:50Clean-levelwistarmaleratswererandomlydividedinto5groups.GroupA：doubleRNA