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时间:2019-02-28
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1、中图分类号:硕士学位论文CTGF和TIMP-1shRNA对肝纤维化大鼠的影响院(系)、所临床医学院研究生姓名舒福丽学科、专业内科学导师姓名张建军教授二Ο一二年五月目录CTGF和TIMP-1shRNA对肝纤维化大鼠的影1响………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………51.4材料与方法……………………………………………………81.5结果…………………………………
2、…………………………211.6讨论……………………………………………………………361.7结论……………………………………………………………421.8参考文献………………………………………………………431.9英汉缩略词对照表……………………………………………462致谢……………………………………………………………47肝纤维化的基因治疗(综述)………………………………483CTGF和TIMP-1shRNA对肝纤维化大鼠的影响摘要目的:研究CTGF和TIMP-1短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达质粒重组体对
3、肝纤维化大鼠肝脏组织CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-IIImRNA基因表达及CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-III蛋白表达情况的影响,探索抗肝纤维化的机制,为肝纤维化的基因治疗探索新思路。方法:50只清洁级Wistar雄性大鼠被随机分为A组:双重RNA干扰组;B组:CTGF干扰组;C组:TIMP-1干扰组;D组:空载质粒治疗对照组;E组:模型对照组。每组大鼠腹腔注射1%DMN溶液,每次注射80μl/100g,每周连续注射3次,共3周。从第3周末开始尾静脉高压注射质粒干扰:A组注射psiRNA-GFP-Com(
4、含有CTGF和TIMP-1),B组注射psiRNA-GFP-CTGF,C组:注射psiRNA-GFP-TIMP-1,D组注射空载质粒psiRNA-DUO-GFPzeo,E组:不注射。每2周注射1次,共4次。所有大鼠于实验第12周末处死,收集肝组织备用。各组肝脏组织中性甲醛固定后HE染色检测肝组织病理形态学改变,免疫组织化学检测各组肝组织中CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III蛋白表达情况。抽提各组肝脏组织RNA并逆转录成cDNA通过荧光定量PCR检测各组肝脏组织的CTGFmRNA、TIMP-1mRNA、Col-ImRNA
5、及Col-IIImRNA的表达情况。结果:与模型对照组(E组)相比,空载质粒治疗组(D组)CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-IIImRNA及肝脏组织中的CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III蛋白的表达均无差异,A组、B组、C组CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-IIImRNA的表达降低,肝脏组织中CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III蛋白的含量减少,其中双重RNA干扰组psiRNA-GFP–Com质粒转染(A组)肝纤维化大鼠后其对Col-ImRNA的表达及肝组织中I型胶原的蛋白含量的抑制程度
6、优于单干扰组质粒转染(P<0.01或P<0.05)。结论:1.针对CTGF和/或TIMP-1的RNA干扰可明显抑制肝纤维化大鼠的CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III基因表达及相关蛋白的分泌。2.双重联合RNA干扰作为抗肝纤维化基因治疗的方法,其治疗效果可能会优于单个RNA干扰。关键词:RNA干扰;结缔组织生长因子;基质金属蛋白酶组织抑制因子-1;短发夹RNA;转染;肝纤维化;大鼠;尾静脉高压注射;N-二甲基亚硝胺EffectofCTGFshRNAandTIMP-1shRNAonratswithhepaticfibros
7、isAbstract:Objectives:TostudytheeffectofCTGFshRNAandtheTIMP-1shRNAplasmidsontheexpressionofTIMP-1,CTGF,Col-IandCol-IIImRNAsandtheexpressionofCTGF,TIMP-1,Col-IandCol-IIIproteinsintheratswithhepaticfibrosis,andfuthertoexploretheprophylaxismechanismofshRNA,andtofindanewme
8、thodofgenetherapyofhepaticfibrosis.Methods:50Clean-levelwistarmaleratswererandomlydividedinto5groups.GroupA:doubleRNA
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