中药肝复健冲剂对大鼠肝纤维化形成的影响

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1、中药肝复健冲剂对大鼠肝纤维化形成的影响【关键词】胶原　　InfluenceofGanfujiangranuleformulaonprocessofliverfibrosisinrat　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectofganfujiangranuleoncollagensedimentinrathepaticfibrosisinducedbydiethylnitrosamine(DEN).METHODS:DENinducedlivefibrosismodelinistratedas

2、interventionmeasure.Influence(EFJgroup)ofganfujiangranuleoncollagensedimentandhepatocyteproliferationinedbyPicricacidSirusredstainingandimmunohistochemicalstaingmethods,andanalyzedbyputerimageanalysistechnique.RESULTS:Collagensedimentinratliverincreasedgraduallyode

3、l.Inflammatorydamageandthedegreeoflivercirrhosisodelgroup.Collagensedimentinliverandpositiveexpressionofproliferotivecellnumberontgen(PA)inhepatocytesent:4entinratliverandmaypreventlivercirrhosistransittohepatocarcinomainsomedegreebyinhibitoverproliferatingofhepato

4、cytes.　　【Keyedicine;livercirrhosis;collagen　　【摘要】目的：观测中药肝复健冲剂对二乙基亚硝胺（DEN）诱导大鼠肝纤维化形成的影响.方法：建立DEN诱导大鼠肝硬化模型，同时给予肝复健冲剂进行干预，应用天狼红苦味酸特染法、免疫组化染色法及计算机图像分析技术检测中药对DEN致大鼠肝纤维化过程胶原沉淀及肝细胞增殖特性的影响.结果：随着模型大鼠肝纤维化程度加重，肝内胶原沉积量亦呈逐渐增加趋势.中药组大鼠肝脏炎性损害及肝纤维化程度均较同期模型组大鼠轻，胶原沉积量及细胞增殖核抗原(PA)阳性着色

5、肝细胞数明显减少，两组间差异有统计学意义,P<0.05［胶原沉积量：4a公司.天狼红（解放军第475医院赠送）.PA检测试剂盒购自DAKO公司.中药饲料：肝复健冲剂按30.4g・kg-1均匀混合于基础饲料中压制而成（第四军医大学实验动物中心提供）.　　1.2方法　　1.2.1模型建立大鼠适应环境3d随机分为模型组（Model）及中药组(Ganfujian，GFJ)，每组各30只，分别以0.1g・L-1DEN自由饮水，同时分别给予基础饲料或含中药的饲料喂养.16.常规HE染色、切片胶原特殊染色

6、及免疫组化染色.　　1.2.2切片胶原染色按天狼红饱和苦味酸法［4］.普通石蜡切片,厚4μm;常规脱蜡至水,0.1mol・L-1天狼红饱和苦味酸,避光室温孵育20min;不洗,950mL・L-1乙醇脱水,二甲苯透明,封片.　　1.2.3PA免疫组织化学染色取材肝组织固定于100mL・L-1缓冲甲醛溶液24h，常规石蜡包埋，切4μm厚切片，二甲苯、梯度乙醇脱蜡至水；染色方法为免疫ABC法.以0.1mol・L-1PBS取代一抗作阴性对照，以正常大鼠肝组织作正常对照.　　1.

7、2.4染色结果判定及计算机图像分析肝脏背景为淡黄色，胶原阳性着色呈红色,采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文分析系统,随机选择5个汇管区进行染色胶原的定量分析(面积占视野面积),取其均值.PA阳性着色为覆盖胞核的棕黄色颗粒.用网格（10×10）测试法计数阳性肝细胞.切片各选择10个按同一方向移行、不重叠的高倍镜视野（×40），记数阳性及阴性细胞数（100个细胞）.　　统计学处理：采用SPSS统计分析软件对所获得的数据进行组间秩和检验.　　2结果　　2.1大鼠肝纤维化过程组织形态学变化模型组大鼠使用DEN4~8.　　表2

8、大鼠肝细胞阳性表达PA的比较　(略)　　3讨论　　肝纤维化是许多慢性肝病重要的中间环节，是由于肝内纤维生成与降解失衡，致使过多的胶原在肝内沉积，常伴于炎症并可发展为肝硬化.肝纤维化形成作为肝硬化发展过程中的一个重要现象，与肝硬变的发展是平行的［5］,因此肝纤维化程度的精确了解是慢性肝病研究