2型糖尿病大鼠肾脏toll样受体4和a20表达及辛伐他汀干预的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文2型糖尿病大鼠肾脏Toll样受体4和A20表达及辛伐他汀干预的实验研究姓名：房芳申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：刘宽芝201203中文摘要2型糖尿病大ToU样受体4和A20表达及辛伐他汀干预的实验研究．摘要目的：随着生活水平的提高和生活方式的改变，糖尿病(diabetesmellitus，DM)的患病率在全球范围内呈逐年上升趋势。糖尿病肾病(diabeticnephropathy，D】哪是糖尿病常见的慢性微血管并发症，也是导致终末期肾功能衰竭的重要原因。Toll样受体4(Toll．1ikereceptor4，TLR

2、4)是Toll蛋白家族的重要成员之一，也是人类发现的第一个Toll相关蛋白，参与了机体的多种炎症和免疫反应。研究表明，TLR4与糖尿病本身及糖尿病慢性并发症有一定关系，但对于TLR4与DN关系的直接研究相对较少。锌指蛋白A20是一种Cys2／Cys2型胞液锌指蛋白，在炎症反应中，几乎体内所有器官和组织细胞都能表达，它的主要作用是限制炎症反应中核因子r,B(nuclearfactor-r,B，NF．r,B)和激活蛋白．1(activatorprotein．1，AP．1)活性，保护组织细胞免受损伤，是一种内源性调控蛋白。他汀类药物是临床上应用较多的调

3、脂类药物且疗效确切，近来有研究表明辛伐他汀有减轻炎症反应的作用，其作用独立于降脂作用外。本实验通过高糖高脂饮食喂养Sprague．Dawlay(SD)大鼠，使大鼠产生高胰岛素血症和胰岛素抵抗，后注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)破坏大鼠胰岛p细胞，从而复制2型糖尿病(Type2diabetesmellitus，T2DM)大鼠模型。应用免疫组化法和RT-PCR法检测大鼠肾脏中TLR4和A20的表达情况，揭示TLR4和A20与DN的关系；并给予部分糖尿病大鼠进行辛伐他汀干预治疗，以探讨其对糖尿病大鼠肾脏的防治作用及其可能的作

4、用机制。方法：应用随机数字表从40只SD大鼠中随机选取10只作为正常对照组(A组)，喂以普通饲料，其余作为实验组，给予高糖高脂饲料(普通饲料中加入15％熟猪油、2．5％胆固醇、20％蔗糖)，实验组大鼠体重逐渐增加，产生胰岛素抵抗，4周后腹腔注射小剂量STZ，剂量为30mg／kg，6周后测空腹血糖(fastingbloodglucose，FBG)和空腹胰岛素(fastinginsulin，FINS)水平，选取FBG>7．8mmol／L且伴有胰岛素敏感指数(insulinsensitivity，ISI)降低者为2型糖尿病模型。将造模成功的糖尿病大鼠随

5、中文摘要机分为糖尿病组(B组，13只)和辛伐他汀干预组(C组，13只)，实验共14周。于第14周末测量各组大鼠体重，心脏取血测定FBG、胆固醇(cholesterol，TC)、甘油三酯(tdglyceride，TG)、低密度脂蛋白胆固醇(10wdensitylipoproteincholesterol，LDL—C)、高密度脂蛋白胆固醇(1lighdensitylipoproteincholesterol，HDL．C)、血肌酐(serumcreatinine，Cr)、血尿素氮(bloodureanitrogen，BUN)、留24h尿测定尿白蛋白(u

6、rmaryalbumin，UAlb)水平；取大鼠肾脏，称重并计算肾脏肥大指数(KW／BW)；取肾脏组织多聚甲醛固定待光镜下观察；应用免疫组化法检测肾脏TLR4和A20蛋白的表达，使用计算机图像分析系统进行图像分析，计算TLR4和A20的IHS；用RT-PCR法检测肾脏TLR4mRNA，用Bandscan5．0凝胶分析系统测定OD值。应用SPSSl3．0统计软件对结果进行统计学处理，两组比较采用所’检验，组间比较时，采用方差分析或秩和检验。结果：l实验第6周末各指标结果：注射STZ两周后，实验组大鼠FBG为12．02士1．83mmol／L，高于正常

7、对照组的6．16士O．38mmol／L(P<0．01)；实验组的FINS为18．37(18．08，19．43)mlU／L，与对照组的17．75(17．08，18．53)mlU／L比较无统计学差异(P>O．05)，但糖尿病组的ISI为0．0046(0．0038，O．0052){6于正常对照组的0．0094(0．0088，0．0095)(P

8、6mmol／L、HDL—C1．29士0．25mmol／L、UAlb2．67+0．21ug／24h、Cr59．02士3．02lmaol／L