实验性脑出血大鼠脑组织toll样受体4的表达及意义论文

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1、实验性脑出血大鼠脑组织Toll样受体4的表达及意义论文李俐涛，张祥建，尹静，杨燚【摘要】目的:探讨TLR4在脑出血大鼠血肿周围脑组织中的表达变化及其作用.方法：采用自体尾动脉血注入法制作脑出血大鼠模型，将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组，造模完毕后按不同时间点（术后6,24,48,72h和7d）随机分为5个亚组，每组5只.各组于不同时间点取材，采用反转录多聚酶链反应(RTPCR)方法检测大鼠脑组织TLR4mRNA的相对表达.结果：各实验组各时间点TLR4mRNA均表达.freelRNA的相对表达在各时间点无显著差异（P＞0.05）；模型组与假手术组相比TLR4mRNA相

2、对表达显著升高(P＜0.05)，且在48h达高峰,持续到72h.模型组相同时间点TLR4mRNA的相对表达与假手术组比较均明显增高，差异有统计学意义(P＜0.01）.结论：脑出血大鼠模型TLR4表达增高，提示TLR4在脑出血炎症损伤中可能具有一定作用.【关键词】脑出血；大鼠；Toll样受体【Abstract】AIM：ToexploretheexpressionofTolllikereceptor4(TLR4)inbraintissuesurroundinghematomaofcerebralhemorrhageratsanditsroleinbraininflammatory

3、injury.METHODS:Thecerebralhemorrhagemodelsofratsadebyinjectingautologousarterialbloodcollectedfromcaudalartery.FiftymaleSDratslydividedinto2groups:shamoperationandmodelgroups.TheexpressionofTLR4mRNAinthebraintissuesurroundinghematomainedsimultaneouslybyRTPCR.RESULTS:TheexpressionofTLR4gene

4、inmodelgroupoperationgroup（P＜0.05).CONCLUSION:TheexpressionofTLR4isincreasedinbraintissuesurroundinghematomaofcerebralhemorrhagerats.ItisindicatedthatTLR4isincreasedinbraintissuesurroundinghematomaofcerebralhemorrhagerats,ightbeinvolvedininflammatoryreactionsofintracerebralhemorrhage.【Keyor

5、rhage;rat;Tolllikereceptor0引言脑血管病是临床常见病之一,尤其脑出血具有较高的发生率、致残率、病死率，其中一个很重要的原因是出血后水肿的形成和发展，现已证明脑出血后的炎症反应是脑水肿的直接原因［1］.Toll样受体4(Tolllikereceptor4,TLR4)在跨膜信号转导受体家族TLRs中占有重要的位置［2］,可介导细菌内毒素(lipopolysaccharide，LPS)诱导的炎症反应.研究［3-4］发现,TLR4与心、肝、脑缺血性非生物性炎性损伤关系密切,但TLR4是否也参与了脑出血非生物性炎性损伤尚不清楚,我们采用自体尾动脉血注入法建立

6、大鼠脑出血模型，初步探讨TLR4在脑出血非生物炎性损伤中的作用.1材料和方法1.1材料健康雄性SD大鼠50只，体质量300～350g，由河北医科大学基础医学院动物实验中心提供［许可证号DK0403007］，清洁级.NARISHIGESR6N脑立体定向仪（日本）；电子天平(日本ANDHR120,精确度为0.1mg)；RTPCR相关试剂(美国Promeger公司)；所用引物由上海生物工程技术服务有限公司合成；PCR扩增仪(德国Eppendorf公司，572H)；低温离心机（德国Eppendorf公司，5417R），凝胶成像分析系统(德国Eppendorf公司，SYNGENE

7、).1.2方法1.2.1模型制作参照本实验室的方法进行［5］，即将动物用水合氯醛按35mg/kg腹腔注射麻醉后，取尾动脉不抗凝血50μL，应用脑立体定向技术注入大鼠脑内右侧尾壳核，术毕用医用骨蜡封闭针孔.假手术组只进针不注血.1.2.2动物分组将大鼠随机分为脑出血组（25只）、假手术组（25只）.造模完毕后按不同时间点随机分为5个亚组，即术后6,.freelg，置于冰浴中的匀浆器并迅速匀浆，用于抽提总RNA，剩余组织置于液氮中，-80℃保存.1.2.4血肿周围脑组织总RNA抽提与纯化在冰浴匀