toll样受体4在佐剂性关节炎模型大鼠外周血单核细胞中的表达及意义

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1、Toll样受体4在佐剂性关节炎模型大鼠外周血单核细胞中的表达及意义：张殿增，孟列素，王红英【摘要】目的研究佛氏完全佐剂性关节炎(AIA)大鼠外周血单核细胞(PBMC)对Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)、TLR4mRNA的表达及其与关节炎评分的关系。方法流式细胞仪测定CD14+TLR4+细胞占CD14+细胞的比例和TLR4-PE的平均荧光强度(MIF)；Northernblot法测定PBMCTLR4mRNA的表达量。比较造模后15d与正常对照组和造模后25d时CD14+TLR4+/CD14+、MIF及其TLR4mRNA表达量的差异，并用Mann-IF的相关性。

2、结果在造模后15d，CD14+TLR4+/CD14+、TLR4MIF和PBMCTLR4mRNA的表达较正常对照组和造模后25d明显增高(P<0.01)，而且TLR4MIF与关节炎的评分有明显的相关性(15d：r=0.826，P<0.01；25d：r=0.688，P<0.05)。但造模后25d，CD14+TLR4+/CD14+、TLR4MIF和PBMCTLR4mRNA的表达与正常对照组和造模前相比无统计学意义(P>0.05)。结论TLR4与AIA发病有密切关系，提示固有免疫反应在类风湿性关节炎(RA)及其他自身免疫性疾病的发病中有重要的作用。【关键词】佐剂性关节炎；大鼠

3、；Toll样受体4；外周血单核细胞　　ABSTRACT:ObjectiveTodemonstratetheroleofinnateimmunityreactioninrheumatoidarthritisandotherautoimmunediseasesbystudyingtheexpressionoftoll-likereceptor4(TLR4)byperipheralbloodmononuclearcell(PBMC)inratseanintensityoffluorescence(MIF)ofTLR4+cellsetry.ExpressionofTLR4mRNAbyPBMCined

4、byNorthernblot.CD14+TLR4+/CD14+ratio,TLR4MIFandexpressionofTLR4mRNAbyPBMCinthemodelgroupat15daysafterAIAalcontrolgroupandmodelgroupat25days.ThecorrelationbetRNAexpressioninmodelgroupat15daysafterAIAodelgroupsat25days(P<0.01),andagoodcorrelationbetodelgroupat25daysafterAIA(P>0.05).Itindicatedt

5、hatTLR4participatedinthepathogenesisofrheumatoidarthritis.ConclusionTLR4expressedbyPBMCiscloselyassociatedatoidarthritis,munityresponseplaysanimportantroleinpathogenesisofRAandotherautoimmunediseases.　　KEYP)，介导宿主先天性免疫反应，并激活后天获得性免疫反应。TLR4是表达于除T、B淋巴细胞和NK细胞以外的所有免疫细胞的表面，对PAMP具有广谱识别功能［1］。近来的研究发现，葡萄球菌的细胞

6、壁不能使TLR信号传导连接蛋白缺乏的小鼠产生关节炎［2］，TLR4缺乏小鼠关节炎的严重程度明显减轻［3］，在小鼠关节内注射TLR配体可使之产生严重的关节炎［4-7］，在类风湿关节炎(RA)患者的关节内存在由微生物产生的TLR配体。由此我们推测，TLR信号传导系统在RA的发生和发展过程中起着重要的作用。因此，在本研究中，我们通过检测RA小鼠模型外周血单核细胞(PBMC)表面TLR4及其mRNA的表达情况，并分析其与关节炎严重程度的关系，阐明TLR在RA发病和进展中的作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物及模型建立　　体重为150-200g的SD品系大白鼠，雄性，由西安交通大学医学院实验动物中

7、心提供。群居笼养，供丸剂饲料和自来水，自由摄食饮水。造模时于大鼠尾巴根部注射弗氏完全佐剂，诱发类似于人类RA的关节炎，根据动物耳部、尾部结节的数目和足跖关节肿胀度，按0-4级评分(Score)［8］。　　1.2主要试剂和仪器　　CD14-FITC和TLR4-PE单克隆抗体分别购自GenemyInc和SantaCruz生物技术公司；RT-PCR所用的酶及其试剂盒购自北京天为时代科技有限公司。FACSCalibu