乙肝患者外周血单核细胞toll样受体2表达水平变化及其意义

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1、乙肝患者外周血单核细胞Toll样受体2表达水平变化及其意义张为民粪文波谢亚琴(通讯作者)(齊南大学第二附属医院<深圳市人民医院检验科>518020)【摘要】目的探究乙肝患者外周血单核细胞Toll样受体2表达水平变化及其意义。方法将相继收入我院的慢性乙肝患者按病情严重程度进行分级(轻、屮、重)。测量分为轻、屮、重三级的患者的血单核细胞的TOLL样受体2的平均荧光强度，同时设立健康人为对照。结果30例正常人TLR2测定结果平均值为20.5±2.1(MFI),30例轻度乙型慢性肝炎患者测定结果的平均值为26

2、.4±2.7(MFI),两组平均免疫荧光值对比t=11.05,P<0.05,差异显著。三组乙型慢性肝炎屮，轻度组、屮度组、重度组的平均免疫荧光强度分别为26.4±2.7、30.8±1.9、49.9±15.8。轻度组和屮度组、屮度组和重度组对比，t值为7.30、6.57,且P<0.05o差异有统计学意义(P<0.05)。结论乙肝患者外周血单核细胞Toll样受体2表达水平随着慢性乙肝患考的病情严重程度增加而增加，且慢性乙肝患者的外周血细胞单个核细胞与正常健康

3、人相比有显著增加。说明Toll样受体2和慢性乙型肝炎的发展有相关性，并且很可能参与了其发病的过程。【关键词】乙肝Toll样受体2单核细胞乙肝是乙型病毒性肝炎。乙型肝炎病毒感染机体后因个体情况的不同将对肝细胞有不同损伤的表现。其发病过程与机体的先天性免疫以及后天性获得性免疫都有密切的关系。如今研究多表明乙肝对于肝脏的损伤主要是由机体的免疫机制占主导地位[1],其屮HBV引发的爆发型重症肝炎就是很好的例子。爆发重症肝炎的患者里不乏身体健壮于常人且免疫系统功能很强的青壮年。乙肝可分为急性乙肝和慢性乙肝。急性乙肝患者大多可自愈，多表现

4、为一过性黄疽，甚至没有明显的临床症状。故本次研宄选取慢性乙型肝炎的患者进行相关调查研宂。慢性乙型肝炎是由于病毒量大、机体的自然性免疫或者获得性免疫功能降低，机体无法及吋彻底消火体内HBV而致乙肝病毒长期存在于机体内。由于HBV的存在，机体启动免疫应答来消火病毒。为了清除肝细胞内的HBV，免疫系统只能破坏肝细胞。以及一系列的细胞因子的激活、协冋刺激因子的表达和致炎因子的释放等级联炎症反应使得肝细胞不断被破坏，反复的炎症反砬将奋可能导致肝脏的纤维化，从而导致肝硬化的发生。最终冇可能走向肝癌的终点。这就是被称为肝病“死亡三部曲”的发

5、展。长期以来，许多研究己证明了条件免疫应答在乙型肝炎发展中作用。继而人们的眼光又投向了非条件免疫应答在其中的作用。非特异性免疫系统中有一类具有识别病原体作用的受体。该类受体叫Toll样受体家族（TLRS）。其成员通过识别病原体的特异结构或者其代谢产物来激活非特异性免疫系统---病原体相关分子模式（PAMPS）。故TLRs被称为病原体模式的识别受体。其中TLR2分布较广，存在于外周血单个核细胞、树突细胞、肝细胞等处，而且配体谱也十分广泛。本文探讨TLR2在乙肝患者外周血单核细胞表达水平的变化情况，进而分析其临床意义。1一般资料1

6、.1一般资料随机选取相继收入我院治疗的慢性乙肝患者进行研究。这些患者均根据病毒性肝炎防治方案为诊断依据。收取轻度、中度和重度的慢性乙肝患者各30例，共60例乙肝患者。其中男性患者51例，女性患者39例，年龄范围在29-77岁，平均年龄为55岁。60名患者中不含己使用或正使用奋调节免疫功能的药物进行治疗的患者，11不含冇具冇其他系统的重人疾病的患者和酒精肝脂肪肝患者。再随机选取健康人为健康组，平均年龄49岁（23-67岁）。对比分析四组患者（轻度组、中度组、重度组、正常组）的病程、年龄等方面差异，P>0.05,无统计学意义

7、。1.2方法1.2.1采血慢性乙肝三组、健康组的患者都在清晨空腹吋用真空抽血管抽取静脉血于EDTA-K2抗凝管。注意无菌操作等技术规范，且标本应及吋进行TLR2的测定。1.2.2测定外周血单个核细胞表面TLR2采用免疫荧光流式细胞术进行测定。首先在洁浄试管中加入10ul的别藻青蛋白标记的抗CD14抗体试剂（别藻青蛋白最大吸收峰为650nm）和10ul异硫氰酸荧光素标记的抗TLR2抗体。设立FITC-鼠lgG2aκ为对照。往试管里加入抗凝全血标本lOOul。然后常规震荡混匀后室温避光孵育；30min后加入溶血素200

8、0ul，放置lOmin使标本中血细胞溶解；离心弃去液体后用稀释备好的PBSBuffer洗涤两次；再用PBS配液106/ml进行流式细胞荧光免疫术检测。最后进行数据处理，排除破碎和坏死等干扰细胞，以标记CD14为界，从而界内即得到CD14+的单个核细胞。选取1000个界内细胞经