扇贝裙边糖胺聚糖对6-ohda诱导sh-sy57细胞氧化应激与凋亡的保护机制研究

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1、扇贝裙边糖胺聚糖对6-OHDA诱导SH．SY5Y细胞氧化应激与凋亡的保护机制研究摘要目的：研究扇贝裙边糖胺聚糖(ss．GAG)对6．羟基多巴胺(6．OHDA)诱导的人神经母瘤细胞株SH．SY5Y丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性、早期凋亡率以及凋亡相关基因Bax、Bcl．2与蛋白CytC、Caspase．9表达的影响，探讨SS．GAG保护多巴胺能神经元的作用机制。方法：体外培养SH．SY5Y细胞，随机分为对照组、6-OHDA损伤组和6-OHDA+SS．GAG(200、400和800uedml)处理组。测定细胞中MDA含量和LDH活性，AnnexinV-FITC／PI

2、双染流式细胞术检测细胞凋亡，实时荧光(real-time)PCR检测细胞Bcl．2、BaxmRNA表达的变化，蛋白质免疫印迹法(Westernblotting)检测胞质内细胞色素C(CytC)的蛋白释放量，流式细胞技术(FCM)检测活化Caspase-9蛋白表达量。结果：与对照组相比，6-OHDA损伤组的MDA含量增加，LDH活性增高，早期凋亡率升高，Bcl．2mRNA表达降低，BaxmRNA表达升高，胞质内CytC释放量增多，表达活化Caspase．9蛋白的细胞数增加，各项指标均存在显著差异(P

3、Y5Y细胞中MDA含量减少，LDH活性降低，细胞早期凋亡率降低，Bcl．2mRNA表达升高，BaxmRNA表达降低，胞质内CytC蛋白含量减少，活化的Caspase．9蛋白表达量减少。结论：SS．GAG能降低6-OHDA诱导SH．SY5Y细胞的氧化应激水平。通过上调Bcl．2基因的表达和下调Bax基因的表达，抑制CytC从线粒体释放到胞质内，进而减少Caspase．9蛋白的活化，最终抑制6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。关键词：扇贝裙边糖胺聚糖；6．羟基多巴胺；氧化应激；凋亡螂㈣Studyontheprotectivemechanismofscallopskirt—gl

4、ycosaminoglycanon6-OHDA-inducedapoptosisinSH-SY5YcellsAbstractObjective：Toinvestigatetheeffectofscallopskirt·-glycosaminoglycan(ss--GAG)onthecontentofMDA，theactivityofLDH，theapoptosisandtheexpressionofseveralapoptosis-mlatedgenesandproteinsinSH··SY5Ycellsinducedby6-OHDAandthenstudytheprotect

5、ivemechanismofSS-GAGondopaminergieneurons．Methods：HumanneuroblastomaSH—SY5Ycellsweredividedintocontrolgroup，6-OHDAdestroygroupand3treatmentgroupstreatedwitll6-OHDAandSS-GAG(200，400and800Ixg枷)．ThecontentofMDAandtheactivityofLDHweremeasured，themRNAexpressionsofBcl-2andBaxgeneswereevaluatedbyre

6、al-timePCILtheproteincontentofCytCincytoplasmwereanalyzedbyWesternblotting，andthepercentageofapoptosisandtheactivationofCaspase-9Wasmeasuredbyflowcytometry．Results：Compared州虹lthecontrolgroup，allitemsofthe6-OHDAdestroygrouphaveremarkabledifferencesP

7、eincreased，thepercentageofearlyapoptosiswaselevatory,themRNAexpressionofBcl一2wasreduced，themRNAexpressionofBaxWaSheightened，theproteincontentofCytCincytoplasmwasincreased，andthenumberofcellsexpressingactivatedCaspase·9WaSelevated．Afterpretreatmentw