n-3脂肪酸对氧化应激诱导的细胞凋亡的作用及其分子机制

《n-3脂肪酸对氧化应激诱导的细胞凋亡的作用及其分子机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文n-3脂肪酸对氧化应激诱导的细胞凋亡的作用及其分子机制EFFECTSOFN-3FATTYACIDSONOXIDATIVESTRESS-INDUCEDAPOPTOSISANDTHEUNDERLINEDMOLECULARMECHANISMS王佳煜哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号：Q74学校代码：10213国际图书分类号：557密级：公开理学硕士学位论文n-3脂肪酸对氧化应激诱导的细胞凋亡的作用及其分子机制硕士研究生：王佳煜导师：徐仲副教授申请学位：理学硕士学科：生物学所在单位：海洋科学与技术学院答辩日期：2015

2、年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIndex:Q74U.D.C:557DissertationfortheMasterDegreeinScienceEFFECTSOFN-3FATTYACIDSONOXIDATIVESTRESS-INDUCEDAPOPTOSISANDTHEUNDERLINEDMOLECULARMECHANISMSCandidate：JiayuWangSupervisor：Prof.ZhongXuAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpeciality：

3、MarineScienceAffiliation：SchooloftheMarineScienceandTechnologyDateofDefence：June,2015Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要本课题利用SH-SY5Y细胞作为模型研究n-3多不饱和脂肪酸（n-3PUFAs）对氧化应激诱导的细胞凋亡的作用及相关分子机制。研究采用终浓度为60μmol的n-3PUFAs预处理细胞24小时后，再以终浓度为500μM的

4、过氧化氢处理细胞一定时间。用Hoechst染色检测细胞凋亡、用Westernblot和RT-PCR方法研究线粒体凋亡通路中Bcl-2家族蛋白的表达、MAPK抗凋亡信号通路中相关蛋白的表达、Nrf-2-ARE抗氧化应激通中下游目的基因HO-1的表达。用相应试剂盒检测线粒体膜电位（MMP）的丧失、活性氧（ROS）的生成。研究结果表明，经过500μM过氧化氢处理24h后，SH-SY5Y细胞发生严重的细胞凋亡，60μmoln-3PUFAs预处理能显著抑制这种凋亡现象。对细胞凋亡信号通路的Bcl-2家族相关蛋白表达的研究发现，n-3PUFA

5、s预处理的细胞能够显著降低过氧化氢引起的促凋亡蛋白Bax、Bak表达增加；抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低的现象。过氧化氢刺激导致细胞正常MMP丧失、细胞内ROS水平显著上升，而n-3PUFAs预处理的细胞能维持正常MMP，保护细胞免受氧化应激下的线粒体损伤和显著抑制ROS水平的升高。MAPK抗凋亡信号通路中相关蛋白的表达研究发现，n-3PUFAs预处理的细胞能够显著降低过氧化氢引起的细胞内Erk蛋白磷酸化水平上升，缓解细胞抵御氧化应激压力，而对p38的磷酸化调控作用不显著。在对HO-1基因表达研究中，RT-PCR结果显示细胞内该基因

6、在过氧化氢刺激下无显著变化，而n-3PUFAs预处理在12h内各个时间点对其表达也无显著调控作用。综上所述，n-3PUFAs可以抑制过氧化氢诱导细胞凋亡现象，通过调节Bcl-2家族和MAPK信号通路的相关蛋白对凋亡起调控作用，该过程可能无HO-1的参与。此外，n-3PUFA可以降低细胞内ROS水平、维持细胞正常MMP保护细胞线粒体功能。关键词：n-3PUFAs；氧化应激；细胞凋亡；Bcl-2；MAPK；ROS-I-哈尔滨工业大学理学硕士学位论文AbstractInthisstudy，weusedhumanneuroblastoma

7、SH-SY5Ycellasamodeltoinvestigatetheeffectsofn-3PUFAsonoxidativestress-inducedapoptosisandtheunderlinedmolecularmechanisms.Cellswerepre-treatedwith60μmolEPA/DHAfor24hthentreatedwith500μmolhydrogenperoxide.ApoptosiswasdetectedbyHoechststaining,expressionofBcl-2familyrel

8、evantproteinsinmitochondrialapoptosispathwayandrelatedproteinsinMAPKanti-apoptoticsignalingpathwayweredetectedbyWesternblot,