a型流感病毒ha+dna疫苗与原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体制备

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1、东北师范大学硕士学位论文高峰一般均发生在当年11月底至次年的2月底，而南方除冬季活动高峰外，还有一个活动高峰(5～8月份)。然而，流感大流行可发生在任何季节。5．周期性流感大流行发生，在时间上不存在周期性。但从现有资料来看，每次大流行之间间隔均在10年以上。(二)流感的主要症状和并发症流感的症状主要表现在呼吸道症状和全身中毒症状，呼吸道症状表现为咳嗽、流涕、鼻塞、咽喉疼痛，全身症状为畏寒、发热、头痛、全身肌肉酸痛、恶心、食欲不振、轻度腹泻等。体温常表现为高热，可达39℃40℃。口腔粘膜可以出现疱疹。如果出现肺部并发症，可以表现为气短、呼吸困难、

2、肺部听诊可闻及粗糙的呼吸音或湿性哕音。不同的患者可以表现为如下的临床类型。单纯型：最常见，常表现为畏寒、发热、全身不适、腰背和四肢酸痛无力、头昏头痛。部分患者会出现食欲不振、恶心、便秘等消化道症状，体温可以高达39℃~40℃，一般持续2～3天后渐降。部分患者可有打喷嚏、鼻塞、咽痛和咳嗽等症状，轻者症状类似于普遍感冒，病程仅1~2天。肺炎型：常发生于老年人、2岁以下的儿童或原先有慢性病患者，表现为高热、烦躁、呼吸困难。咳血痰和明显发绀，肺部听诊呼吸音减低，可闻及湿哕音或哮鸣音。上述症状进行性加重，抗细菌感染药物治疗无效。病程常在lO天至1个月以上

3、。多数患者可以逐渐恢复，少数病例因呼吸衰竭死亡。胃肠型：以恶心、呕吐、腹泻等消化道症状为主。中毒型：较少见，肺部病变不明显，但具有神经系统及全身血管系统损害，临床伴有明显脑炎或脑膜炎症状，如高热不退，神志昏迷。成人可出现谵妄，小儿可出现抽搐，并出现脑膜刺激征，如颈项强直、布氏征阳性等。少数病人由于血管神经系统紊乱或肾上腺出血而导致血压下降或休克等。此型病死率较高。流感可合并细菌性肺炎，在流感症状缓解后2～3日，又出现发热，伴有细菌性肺炎的症状和体征，包括咳嗽、咳脓痰、胸部影像学显示肺实质。常见致病菌有金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和流感样菌，此并发

4、症常发生于已经患有慢性肺疾病的病人，此外也可以发生病毒和细菌混合感染的肺炎。(三)诊断流行病学资料是诊断流感的主要依据之一，结合典型临床表现不难诊岍5

5、，但在流行初期，散发或轻型的病例诊断比较困难。确诊往往需要实验室检查。主要诊断依据如下。1．流行病学史2东北师范大学硕士学位论文在流行季节，一个单位或地区出现大量上呼吸道感染患者或医院门诊、急诊上呼吸道感染患者明显增加。2．临床症状急性起病，畏寒、高热、头痛、头晕、全身酸痛、乏力等中毒症状。可伴有咽痛、流涕、流泪、咳嗽等呼吸道症状。少数病例有食欲减退，伴有腹痛、腹胀、呕吐和腹泻等消化道症状。婴儿

6、流感的临床症状往往不典型，可见高热惊厥；部分患儿表现为喉．气管．支气管炎，严重者出现气道梗阻现象；新生儿流感虽少见，但一旦发生常呈败血症表现，如嗜睡、拒奶、呼吸暂停等，常伴有肺炎，病死率高。3．辅助检查u1(1)外周血象：白细胞总数不高或偏低，淋巴细胞相对增加，重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞下降。(2)胸部影像学检查：重症患者胸部X线检查可显示单侧或双侧肺炎，少数可伴有胸腔积液等。(3)病毒特异抗原及其基因检查：取患者呼吸道标本或肺标本，采用免疫荧光或酶联免疫法检测甲、乙型流感病毒型特异的核蛋白(NP)或基质蛋白(M1)及亚型特异的血凝素蛋白

7、。还可用逆转录．聚合酶链反应(ImPCR)法检测编码上述蛋白的特异基因片段。(4)病毒分离：从患者呼吸道标本(如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物)或肺标本中分离出流感病毒。(5)通过增殖将第(4)项中采集的标本接种到犬肾上皮(MDCK)细胞过夜增殖后，进行第(3)项中有关检查。(6)血清学检查：急性期(发病后7天内采集)和恢复期(间隔2~3周采集)双份血清进行抗体测定，后者抗体滴度与前者相比有4倍或以上升高，有助于确诊和回顾性诊断[注：测H5亚型病毒株抗体需用微量中和实验或特异性高的酶联免疫吸附测定法(ELISA)；微量中和实验需在生物科学实

8、验室3(BSL3)实验室内进行；高致病性禽流感病毒分离与传代也需在BSL3实验室内进行【4】]。4．诊断分类疑似病例：具备流行病学史和临床症状；确诊病例：满足疑似病例标准，同时实验室检查符合上述第(3)或(4)或(5)或(6)中任何一项。(四)鉴别诊断除流感病毒外，多种病毒、细菌等病原体，亦可引起类似症状，如呼吸道合胞病毒、鼻病毒、腺病毒、副流感病毒、冠状病毒，以及肺炎支原体、衣原体和嗜肺军团茵感染等。临床均表现为不同程度的畏寒、发热、乏力、头痛、肌痛、咳嗽、咳痰、胸闷和气促，称为流感样疾病(iIlnuenza1波eilhless，ILI)。虽

9、不易区分，但某些临床特点可提供参考。确诊需依据实验室检查，如病原体分离、血清学检查和核酸检测。1．普通感冒：普通感冒可由多种呼吸道病毒感染引起。除注意