禽流感病毒NS2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备.pdf

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1、第34卷第6期中国预防兽医学报VOl_34．No．62012年6月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJun．20l2doi：10．3969~．issn．1008-0589．2012．06．17禽流感病毒NS2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备陈佳宁，郭晶，李旭勇，陈化兰’(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001)摘要：为制备禽流感病毒(ArC)NS2蛋白的多克隆抗体，本研究将人工合成的NS2基因克隆至表达栽体pET一28a中，转化大肠杆菌BL21(

2、DE3)，经IPTG诱导表达His．NS2重组蛋白。SDS．PAGE和westernblot试验表明，该重组蛋白获得大量表达，可溶性高，并且具有较好的反应原性。将纯化后的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体，并通过间接ELISA检测其效价达1：20000以上。Westernblot和间接免疫荧光试验显示，多克隆抗体能够与NS2蛋白特异性结合。关键词：禽流感病毒；NS2蛋白；原核表达；多克隆抗体中图分类号：$852．61文献标识码：A文章编号：1008．0589(2012)06．048903Prokaryoticexpressionofavia

3、ninfluenzavirusNS2proteinand。preparationofpolyclonalantibodyCHENJia—ning，GUOJing，LIXu—yong，CHENHua—lan’(StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstituteChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Topreparedpolyelonalantibody

4、againstNS2proteinofavianinfluenzavirus(AIV)，theNS2genewassynthesizedandclonedintopET-28atoconstructtheprokaryoticexpressionplasmidpET-NS2．ThesolublerecombinantproteinwasexpressedinE．coliBL21(DE3)withIPTGinductionandidentifiedbytheSDS—PAGEandwesternblot．Thepolyclonalantibody

5、waspreparedfromtherabbitimmunizedwithpurifiedrecombinantprotein．Thetiteroftheantibodywasabout1：20000bydetectionofindirectELISA．ThewesternblotandindirectimmunofluorescenceassayalsoconfirmedthatthepolyclonalantibodyreactedspeciallywithAIVNS2protein，whichwouldbeusedforstudyoft

6、heNS2function．Keywords：avianinfluenzavirus；NS2protein；prokaryoticexpression；polyclonalantibody禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类烈性目前，对于AIV的遗传演化[J]、分子致病机制[2-3]、传染病，严重影响养禽业的发展。自2003年以来已分子水平传播机制[4等方面的研究已取得了一定进有60多个国家和地区爆发禽流感。近年来，由于禽展，但关于病毒蛋白与宿主相互作用方面仍未得到流感病毒(Avianinfluenzavirus，AIV)的抗原漂移，充分阐述

7、。与其它RNA病毒不同，AIV在感染细胞该病毒已跨越种间屏障，威胁人类的健康。WHO的细胞核内复制，新合成的vRNP只有从细胞核转公布数据显示，人感染禽流感病例已达到600例，运到细胞质才能完成下一步的病毒组装【”】。而AIV病死率近60％。的基质蛋白M1和核输出蛋白NS2在这一步起到关收稿日期：2012．02．07基金项目：国家973专项(2011CD505000)作者简介：陈佳宁(1986．)，男，江苏常州人，硕士研究生，主要从事动物流感病毒致病机制研究通信作者：E．mail：hlchenl@yahoo．eom