大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障的变化及其与继发性损伤关系的研究

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1、第四军医大学硕士学位论文大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障的变化及其与继发性损伤关系的研究姓名：毛星刚申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：鞠躬20070501独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，

2、本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：保护知识产权声明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外），可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签名：导师签名：日期：第四军医大学硕士学位论文大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障变化及其与继发性损伤关系的研究

3、硕士研究生毛星刚导师鞠躬教授辅导老师沈学锋博士第四军医大学神经生物研究所中文摘要脊髓损伤（spinalcordinjury,SCI）往往造成患者的终生瘫痪，给家庭和社会带来沉重负担。因而，对SCI后病理变化机制及其相关研究一直是学者们所关注的热点与难点。SCI后血管和神经组织的机械性损坏和断裂引起原发性损伤，继而引发出血、炎症、兴奋性毒性等一系列复杂的损伤过程，导致继发性损伤的进一步扩大。其中原发性损伤中血管的损害可直接引起血-脊髓屏障(bloodspinalcordbarrier，BSCB)的破坏，而BSCB的破坏导致血液

4、中的各种分子进入脊髓实质，造成脊髓组织水肿、缺血缺氧、炎症以及脊髓血液灌注的改变，进一步加重脊髓的损伤。由于BSCB在脊髓损伤过程中的重要性，人们对其进行了大量的研究，但是脊髓损伤后BSCB的变化及其与继发性损伤的关系目前尚未完全清楚。为此，我们以大鼠脊髓撞击伤为模型，研究了SCI后BSCB的变化以及其与继发性损伤的关系。本实验分为两部分。第一部分研究了用免疫球蛋白G（IgG）免疫组织化学染色研究SCI后BSCB的变化。在以往的实验中一般采用示踪剂注射的方法研究SCI后BSCB的通透性变化，但此2第四军医大学硕士学位论文方法

5、操作复杂，并且会影响其他形态的观察。为了寻找简洁可靠的方法，本实验采用IgG免疫组织化学方法染色，显示BSCB对内源性IgG的通透性。EvansBlue(EB)是研究BSCB的一种常用示踪剂，我们比较了SCI后0h、8h、24h、72h、1w各个时间点的IgG染色范围和EB分布范围。结果表明，在各个时间点，IgG的染色范围(mm)为：7.14±0.50、11.43±1.63、9.48±1.71、9.82±0.63、5.59±0.55，EB的分布范围为：7.2±0.51、11.25±1.60、9.27±1.65、9.42±0.

6、54、5.58±0.48，二者在头尾方向上的分布几乎重合。因而IgG染色可作为评估BSCB通透性的一项方便可靠的方法。第二部分，我们采用上述IgG免疫组织化学染色评估SCI后BSCB的变化。对于组织继发性损伤的发展，我们采用HE染色评估组织受损的范围，采用NeuN免疫组织化学染色评估神经元坏死的范围。并比较了IgG染色范围与上述组织损伤范围的变化。在损伤后0h、4h、8h、24h、72h、1w各个时间点，组织的损伤范围（mm）分别为3.64±0.92、6.03±0.47、7.04±0.42、7.11±0.53、9.32±0.

7、17、8.63±0.31，IgG阳性范围分别为7.27±0.43、7.74±0.53、11.43±1.60、9.48±1.65、9.90±0.60、5.55±0.40。IgG阳性区域事实上包括了BSCB破坏的范围和IgG扩散的范围。在0h-72h之间，继发性损伤范围不断增加，IgG范围也呈现不断增加的趋势，其中在8h时达到一个高峰。在72h到1w之间，组织损伤范围变化不明显，而IgG的范围则明显减小（p<0.05）。为进一步研究BSCB与继发性损伤的关系，我们研究了SCI后神经元坏死的情况。我们在实验中发现，损伤后0h在损伤

8、区以及附近的大量神经元内出现IgG。为此我们研究了这些0h和4h3第四军医大学硕士学位论文时IgG阳性神经元以及存活神经元的分布。结果4h时，IgG阳性神经元已消失，且存活神经元的分布与0h时非IgG阳性神经元的分布一致。提示这些IgG阳性神经元已经死亡。而在HE和尼氏染色中，IgG阳性神