c-abl调节aif亚细胞定位的机理研究

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1、中图分类号Q三垒!UDC570硕士学位论文学校代码!Q§三三密级公开c—Abl调节AIF亚细胞定位的机理研究Thesubcellulardistributionofapoptosis—inducingfactorisregulatedbyc—Ablkinase作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：凌丽君生物学遗传学生命科学学院曹诚研究员刘萱副研究员论文答辩日期丝睦上．!Z答辩委员会主席中南大学二O一三年五月＼燃嬲原创性声明一本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论

2、文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：叁巫左日期：型；年上月上日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：垃导师签名撕日期：

3、址年』月旦日c—AbI调节AIF亚细胞定位的机理研究摘要：凋亡诱导因子AIF(apoptosisinducingfactor)由Kroemer等人在1996年发现并命名。当用caspase广谱抑制剂z．vad．fmk处理细胞时，AIF能参与caspase非依赖细胞凋亡途径，促进细胞凋亡。除了能诱导细胞凋亡外，AIF还对线粒体形态完整、能量代谢稳态及氧化应激具有重要调控作用。非受体酪氨酸激酶c．Abl由人9号染色体的c一动Z基因编码，属于Src非受体酪氨酸激酶家族重要成员。在细胞中，c—Abl蛋白能调控多种生命活动，如细胞增殖、细胞粘附、DNA损伤修复、氧化应激及细胞凋亡等。在氧

4、化应激状态下，c—Abl可聚集到线粒体上并介导线粒体功能损伤及细胞凋亡。然而，目前c．Abl通过线粒体调控胞内氧化应激的分子机制尚未明确。实验室前期研究表明，非受体酪氨酸激酶c．Abl能够与凋亡诱导因子AIF相互作用。抗p—Tyr抗体的WestemBlot实验表明，c．Abl和A唱能使AIF发生酪氨酸磷酸化。本研究通过一系列细胞免疫荧光染色、免疫沉淀、免疫印迹实验证明，c．Abl特异性抑制剂STl571可诱导AIF亚细胞分布改变，干扰AIF前体进入线粒体，使细胞内线粒体膜电位下降，最终导致ROs(reactiveoxidativespecies)水平升高，线粒体发生片段化及自噬

5、。该现象能被具有线粒体锚定功能的COX．AIF缓解。进一步研究表明，c．Abl能使AIF前体发生酪氨酸磷酸化，且磷酸化位点很可能位于AIF1．120a．a的线粒体定位信号区域。同时，我们还发现c．Abl通过促进Parkin与AIF相互作用增强Parkin对AIF泛素化的抑制作用，抑制AIF被蛋白酶体降解。因此我们认为，c．Abl一方面通过磷酸化AIF前体促进其胞质一线粒体转运过程以维持线粒体形态及功能完整，另一方面，它可通过促进Parkin与AIF相互作用抑制AIF被蛋白酶体降解，增强AIF蛋白的稳定性。本研究首次证实了c．Abl激酶可通过凋亡诱导因子AIF调控线粒体形态及功能

6、，并阐明了c．Abl通过促进AIF前体酪氨酸磷酸化及影响其胞质一线粒体转运过程调控线粒体生理功能。线粒体对细胞生命活动具有重要调节作用，因此本研究对深入认识Abl酪氨酸激酶家族对线粒体功能及胞内氧化水平的调节作用具有重要意义。图10幅，参考文献33篇。关键词：非受体酪氨酸激酶c—AbI；凋亡诱导因子；线粒体；氧化应激分类号：Q341Thesubcellulardistributionofapoptosis—inducingf’actorisregulatedbyc—AblkinaseAbstract：apoptosis—inducingfactor(AIF)wasdiscoVe

7、redbyKroemerandcoworkersinl996．Inthepresenceofpan—caspaseinhibitorz—Vad．nnk，AIFplaysanimportantroleininducingthecaspase-independentcelldeath．AIFisalsoinvolvedinthemaintenanceofmitochondrialmo叩hology，ene曙ymetabolismhomeostasisregulationandoxidatiVes