影响硫氧还蛋白亚细胞定位的甘草有效组分研究

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1、WuhanInstituteOfTechnology~nJDJijt~~aiSSD!~mmilE:1lla

2、提交日期2015年11月日论文答辩日期：2015年11月25日学位授予单位：武汉工程大学学位授予日期：2015年12月日答辩委员会主席：余龙江教授StudiesoftheeffectivecomponentoflicoriceaffectingthesubcellularlocalizationofthioredoxinAThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofEngineeringMajor：BioengineeringCandidate：P

3、anBoyuSupervisor：Dr.&Prof.WuYuanxinWuhanInstituteofTechnologyWuhan,Hubei430073,P.R.ChinaNovember,2015I1'F&Itt1~I¥J11JfJ1:~~o~ftpJTjQ,~)[q=tB~:t;Ftyj51ffll¥1I*J~5tr,*~x~§~ffM~~~A~-~B~~~~-~M~~~~*o~*)[~~~~lli~~~~A®-~,~B~)Cq=t~~~~~~tyjo*A~~-m~*~~~~~~*~*A~~o~&:i~x1'F*{S:4S:}~

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5、~tii~Xf'F~{S:1S:}~t~2011""'i:f.,,foJ~fa摘要当前国家社会快速进步，百姓生活消费实力也在稳步提升。然而由于发展所带来的一系列污染问题以及人们长期养成的不良生活习惯等方面，都可能会导致人体内部正常的细胞周期发生紊乱，进而会使细胞生理功能等方面出现严重失调，最终恶化演变为“癌症”。硫氧还蛋白（Thioredoxin-1,Trx）属于分布比较宽泛的小分子多功能蛋白，其在进化上比较保守且同属氧化还原类蛋白家族。目前对多种肿瘤细胞系的研究显示，Trx表达水平与肿瘤细胞耐药性之间存在正比例关系；与此同时，相关临床

6、探索也证实了Trx表达水平较高的癌症病人更容易对多种化疗药物产生显著抗药性。这主要是由于化疗药物可刺激Trx入核使其保持还原状态，进而通过增强相关转录因子的活性使肿瘤细胞具有抵抗凋亡继而抗药的能力。因此将Trx作为一个潜在抗癌治疗靶点具有非常重要的价值意义。中医在我国的发展历史悠久，由于其来源丰富且毒副作用小，因此广受病患青睐。所以探寻有效抗癌天然药物的任务也十分紧迫。本论文主要通过采用甘草天然混合组分及其主要单药活性成分作用于人宫颈癌HeLa细胞，从而使用相关方法与手段对Trx在亚细胞中的定位作用进行了一系列探究。首先，采用复方甘草片

7、（其内主要成分为甘草浸膏）作为实验药物设置相同药物浓度不同作用时间实验组和相同作用时间不同药物浓度实验组。Westernblot结果显示两组中，Trx在其细胞核与细胞浆内的表达变化均随着药物浓度的增大和作用时间的延长呈现下降趋势。因此推测在甘草中存在相关有效组分，从而对Trx在亚细胞中的定位下降起到了重要作用。然后，依次采用甘草酸（皂苷类药物）、甘草苷（黄酮类药物）两种主要单药活性成分作为实验药物设置相同药物浓度不同作用时间实验组和相同作用时间不同药物浓度实验组。Westernblot结果发现两组中，Trx在其细胞核与细胞浆的定位表达均

8、伴随着药物浓度增大与作用时间延长呈下降趋势。因此证明了这两种单药活性成分对于Trx在亚细胞中的定位下降起到了重要作用，它们即为甘草中能够抑制Trx入核的有效组分。与此同时，再将三七皂苷R1（皂苷类药物）和芸