ataxin-3亚细胞定位及其对细胞器形态影响

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：敛虹：蛀日期：』旦生年』月鱼日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分

2、内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。一作者签名：麴笪塑导师签名日期：皇!堕年—￡月—塑日摘要Ataxin．3的亚细胞定位及其对细胞器形态的影响目的：本实验通过研究野生型和polyQ扩展突变型ataxin一3蛋白在细胞内的亚细胞定位及ataxin．3蛋白的polyQ扩展突变对线粒体、高尔基体和内质网形态的影响，以期更深入地了解ataxin一3的生物学功能及突变型ataxin．3蛋白的可能毒性作用机制。方法：用Lip

3、ofectamine2000脂质体将GFP．ataxin一3融合蛋白表达载体pEGFP-N1一MJD20Q／68Q转染入Hela细胞。转染24小时后采用间接免疫荧光法用红色荧光染料分别标记识别线粒体、高尔基体和内质网膜的标记蛋白TOM20、GMl30、calnexin。在激光共聚焦显微镜下观察ataxin一3蛋白是否与各细胞器共定位及ataxin一3蛋白的polyQ扩展突变对线粒体、高尔基体和内质网形态的影响。结果：1．ataxin．3蛋白与线粒体标记蛋白TOM20无共定位，但表达polyQ扩展型ataxin一3组线粒体碎裂细胞百分

4、比增加(P

5、发挥毒性作用的场所。图6幅，表0个，参考文献72篇关键词：SCA3／MJD；ataxin一3；线粒体；高尔基体；内质网分类号：R741．02ThesubcellularIocalizationofataxin．3anditseffectsonthemorphologyofcytoplasmicorganoidsAbstractOBJECTIVE：Inordertobetterunderstandthebiologicalfunctionofataxin-3andthepossibletoxicmechanismofmutantata

6、xin．3protein，thisstudywillclarifythesubcellularlocalizationofwidetypeandmutantataxin．3andtheeffectsofpolyQexpansionmutationofataxin一3onthemorphologyofmitochondrion，golgiapparatusandendoplasmicreticulum．METHODES：Firstly,pEGFP-N1-MJD20andpEGFP．N1一MJD68，thevectorsexpressi

7、ngGFP—ataxin-3fusionproteins，wastransfectedintoHelacellswithLipofectamine2000．Secondly,twenty—fourhourslaterindirectimmunofluorescencewasusedtoidentifymitochondriamarkerTOM20，golgiapparatusmarkerGM130andendoplasmicreticulummarkercalnexinrespectively,whichwerestainedwit

8、hredfluorescentdye．Thirdly,observewhethertheataxin-3proteinswereco—localizedwithcytoplasmicorganoidsandtheeffectsofpo