炮制因素对甘草中有效成分甘草苷和甘草酸的影响

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1、炮制因素对甘草中有效成分甘草苷和甘草酸的影响【摘要】目的探讨炮制因素对甘草中甘草苷和甘草酸含量的影响。方法筛选适当提取方法，采用HPLC-DAD技术，ZorbaxSB-C18ODS反向色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，以0.1%(体积分数)甲酸溶液和甲醇为流动相，梯度洗脱，流速1.0ml·min-1，柱温30℃，检测波长250nm和276nm。测定了同一产地、同一批次的甘草和炙甘草中甘草苷和甘草酸的含量。结果甘草经蜜炙后甘草苷和甘草酸的含量增加(P<0.01)。结论炮制因素可显著增加甘草中甘草苷和甘草酸的含量。【关键词】甘草;甘草苷;甘草酸;炮制;高效

2、液相色谱甘草系豆科植物甘草(GlycyrrhizauraienxisFisch)的根及根状茎，俗称灵草、蜜甘、蜜草、国老、甜草等，性味甘平，能调和诸药，始载于《神农本草经》，被列为上品，是临床上最常用的中药之一。甘草在中医临床应用中有甘草和炙甘草之分，其中甘草指生甘草,为原药材除去杂质，洗净、润透切片、生用入药者。炙甘草又名炙草、蜜炙甘草，为生甘草片用蜂蜜拌匀，再炒至不粘手取出摊晾，然后入药者[1]。　　炮制是根据中医药理论，依照辨证施治用药和药物自身性质以及调制、制剂的不同要求所采取的一项制药技术，是中医药学的一大特色[2]。在古代方剂中甘草与炙甘草应用区别明显：

3、甘草性甘偏凉，长于泻火解毒、化痰止咳;而甘草经蜜炙后味转甘温，以补脾和胃、益气复脉力胜。现代药理学研究表明，炙甘草能抗多种心律失常;甘草和炙甘草的调节免疫作用存在明显的差异，蜜炙甘草的调节免疫作用显著强于甘草。炙甘草应为临床补气用甘草的最佳炮制品，可调节机体的免疫功能[3]。由此可见，甘草经炮制后理化性质发生变化，其性味功能也有所改变。我们以甘草中最主要的2种有效成分甘草苷(liquiritin)和甘草酸(glycyrrhizicacid)为检测指标，采用HPLC-DAD法比较甘草炮制前后这2种成分含量的变化，从化学成分角度来探讨中药炮制的合理性、科学性。　　1仪器

4、与试药　　1.1仪器ShimadzuLC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)，包括SCL-10AvpSystemController、SPD-M20ADAD二极管阵列检测器、LC-10ADvp泵、FCV-10ALvp四元低压梯度洗脱系统、LC-Solution色谱数据工作站;梅特勒托利多AE240电子天平(瑞士MettlerToledo公司);Millipore超纯水机;超声波清洗器(型号SK250LH,上海科导超声仪器有限公司)。甲醇(色谱纯,美国J.T.Baker公司);水为超纯水;其余试剂皆为分析纯。　　1.2试药对照品甘草苷(批号：06121824)及甘草酸(

5、批号：06110101)由上海同田生物科技有限公司提供。甘草(批号：20071229;产地：甘肃)及炙甘草(批号：20071229;产地：甘肃)药材购自徐州医药股份有限公司中药饮片厂，经徐州医学院附属医院杜长俊副主任中药师鉴定为真品。甘草和炙甘草为豆科植物甘草的干燥根及根茎的炮制加工品。样品凭证保存于我科。　　2实验方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱：ZorbaxSB-C18反向色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流速1.0ml·min-1，柱温30℃，检测波长分别为250nm和276nm。进样量：20μl，流动相:A为0.1%(体积分数)甲酸水溶液，B为甲醇

6、，用前超声脱气30min，洗脱程序见表1。记录65min色谱图，见图1～3。理论塔板数按甘草苷和甘草酸峰计应不低于4000。表1梯度洗脱程序　　2.2对照品溶液的制备精密称取甘草苷对照品3.68mg、甘草酸对照品2.46mg，用70%甲醇水溶图1甘草提取液250nm处HPLC图谱(1.甘草苷;2.甘草酸)　　图2炙甘草提取液250nm处HPLC图谱(1.甘草苷;2.甘草酸)　　图3对照品溶液250nm处HPLC图谱(1.甘草苷;2.甘草酸)　　液溶解并定容于5ml棕色容量瓶中，得甘草苷0.736g·L-1及甘草酸0.492g·L-1的0号混合对照品标准贮备溶液。从中

7、精密量取适量，用流动相配成甘草苷浓度为0.368、0.184、0.092、0.046、0.0184、0.0092g·L-1及甘草酸浓度为0.246、0.123、0.0615、0.03075、0.0123、0.00615g·L-1的1～6号混合对照品贮备液。　　2.3供试品溶液的制备精密称取甘草粉末及炙甘草粉末(过60目筛，烘干至恒重)各0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入20ml70%甲醇，称定重量，室温放置1h后超声处理(功率250in，取出锥形瓶擦干后放冷到室温，再称重，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，上清液经0.45μm滤膜滤过，取续滤液供HPLC分析。