a亚型和类孟买型的临床和基因分析

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1、答辩委员会主席：盘哟万方数据垫叠答辩委员会成员：边i延塑!坠引巩粕极1良∥I缨彬U缎1殷盘叟堑缝遂伍：碴美鍪鱼万方数据温州医科人学硕I．学位论文目录l哪Y帆2哪9吣1眦咖4帆8吣3硼1腿缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯．18分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．36分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41附录与致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．45万方数据温州医科火学硕{：学位论文英文

3、缩略词英文全称中文全称4万方数据温州医科火学硕，f：学位论文A亚型和类孟买型的临床和基因分析中文摘要ABO血型系统是最早被人类发现的血型系统，在医学输血和器官移植等方面都具有重要意义。经典的血型血清学方法可分为A、B、O、AB四种表型，但这以外存在其他ABO表型，表现为血型正定型和反定型不一致或抗原减弱，导致血型鉴定错误并引起输血困难，造成这利，表型的原因有常见新生儿抗原减弱、老年人抗体减弱，也有较少见基因突变造成血型变异，例如A亚型、B亚型、类孟买型、嵌合体等。本文主要探讨血型变异造成的变异ABO表型，分析变异体的分子机制并制定合适的输血策略。目的：1、对临床上28例正反定型不一致和抗原

4、减弱标本进行基因测序分析，寻找突变位点，分析突变规律，并对其分子机制进行初步探讨。2、通过血清学和基因型鉴定确定正确血型，并探讨输血策略。方法：1、血清学方法测定使用单克隆抗．A、抗．B对先证者进行正定型，A、B、O反定型细胞进行反定型，再通过抗。Al、抗．H、吸收放散等试验进行分类。2、PCR．SSP使用ABO基因分型试剂盒，PCI卜SSP方法初步鉴定ABO基因分型。3、基因测序设计引物和探针，PCR技术扩增ABO基因第6号外显子和第7号外显子，FUTl基因第4号外显子并测序，测序结果与美国NCBI基因库所公布的标准序列进行对比分析。4、制定输血策略采用储存式自体输血方法对符合条件的患者

5、术前储存自体血，术中给予回输，并观察输血效果。结果：1、血清学结果28例正反定型不一致标本通过单克隆抗一A、抗．B、抗一A1、抗一H、吸收放散等试验，结果1例A3亚型，l例Ael亚型，23例A2亚型，3例为类孟买型。2、基因分析1)25例A亚型检测得1例A201，1例A208，l例A209，6例A205，1例A307，15例Al型。基因突变类型除A201、A209存在1061碱基缺失，导致终止密码子失效，万方数据温州医科人学硕jL学位论文酶蛋白C端多出21个氨基酸，其余均为碱基替换，且错义突变居多。A307等位基因第7号外显r467C>T和745C>T杂合碱基改变，导致多肽链P156L和R

6、249W，该位点突变在国内未见报道。2)3例类孟买型FUTl基因第4号外显_了547．552delAG，碱基缺失引起的移码突变提前形成终』卜密码_了，多肽链在268位提前终止，编码产物为野生型多肽链链长的73．12％，其巾1例FUTl基因第4号外显子不仅存在547．552delAG同时存在814A>G杂合碱基改变突变，该复合突变在国际上未见报道，814A>G突变对0【一1，2一岩藻糖基转移酶活性是否有影响，有待进一步探讨。3、If缶床输血情况采用储存式白体输血方式对3名患者术前备白体血液400．700ml，术中回输，回输过程顺利，无输血不良反应，比较采血前后及输血前后血常规各项指标，显示自

7、体血液回输效果良好。结论：1、本文发现突变类型除A201、A209和类孟买型hl存在碱基缺失，其余均为碱基替换，表明碱基替换是造成ABO表型改变的主要原因，其中以错义突变居多。2、本文25例标本通过基因检测得9个A2等位基因其中A205为6例(66．7％)，A201、A208、A209各为1例(11．1％)，研究结果与欧洲人群报道以A201为主不同，与喻琼报道相似，从而表明A2等位基因在中国汉族人群存在多样性，与欧美人群