乙型肝炎患者hbv基因型%2f亚型的分析与临床意义研究

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1、乙型肝炎患者HBv基冈型／亚型的分析与临床意义研究中文摘要乙型肝炎患者HBV基因型／亚型的分析与临床意义研究背景：大量研究发现皿v基因型／亚型与病毒感染途径、基因突变、疾病进程和抗病毒疗效具有一定相关性，且不同地域和人群的基因亚型分布有显著差异。但在以往的研究中，HBV基因型和基因亚型分型的方法多采用PcRI讧LP法，其检测结果受到限制性内切酶的功能状态、酶的反应条件及操作人员技术水平等影响较大，这些因素制约了PCRI强LP的检验效能。传统的PcR产物直接测序法获得的信息直观丰富，是基因亚型分型的金标准，但其敏感性较低，通常只有104Ⅳ恤l水平，无论应用于临床检测还是科学研究都很难

2、达到理想的效果。此外，我们在分析大样本量的序列数据时，发现采用人工判断和统计序列差异的方法工作量大、效率低，而国外已有的船V序列分析数据库都以欧美流行的A型、D型、E型髓V序列为主，且很多数据库需要付费才能使用。目的：本研究拟建立高度敏感特异的皿V序列扩增方法，检测HBVI玎全基因和前C区所有突变；建立Ⅲ≥V序列数据库，借助数据库的数据分析和汇总功能，分析2377例皿V序列的I江区耐药突变情况、前C／BcP突变情况、cTL表位变异情况，并对基因亚型B2和c2在乙肝相关疾病进展各个阶段的比例进行分析，从不同角度阐明册V基因亚型与疾病转归的关系。内容：选取2007年7月至2008年12

3、月于解放军302医院就诊的华北地区(北京、河北、山西、天津、内蒙古五省)2377例慢性皿V感染患者(男性198l例，女性396例；年龄38士13岁)，其中慢性乙肝(c皿)患者1874例，乙肝相关肝硬化(LC)354例，慢加急性肝衰竭(ACLF)32例，肝细胞癌(HCC)117例。诊断标准均参照2000年9月(西安)全国会议修订的《病毒性肝炎防治方案》标准，排除乙丙重叠感染及HⅣ混合感染者。方法：提取慢性砌3V感染患者血清皿VDNA，采用巢式PCR扩增前S／S基因和前C／BCP区基因，对PCR产物直接测序。根据测得前S／S基因序列构建系统进化树确定基因型／亚型。建立包含耐药突变分析、

4、前C／BCP基因突变分析、CTL变异分析等多种生物信息学功能的册V序列数据库，分析基因亚型B2和C2间，RT区耐药突变nL80I、rtV84M、rtVl73L、rtLl80M、rtAl81T、rtTl84A／I／L／P／S、rtS202G、rtM204I／V、rtN236T、rtⅣ1250L的发生率差异；分析前C／BCP区T1753～c／G、T1758C、A1762T、G1764A、C1766T、T1768A、G1862T、G1896A、G1899A的突变发生率差异；分析多聚酶区和表面抗原区CTL特异性表位变异频率和变异类型差异；分析基因亚型B2和C2病毒在不同进程病情患者中的分布

5、频率。第2页乙型肝炎患者HBV基因型／亚型的分析与临床意义研究中文摘要结果：1．建立了高效敏感的HBV序列扩增方法：通过对实验条件的不断优化，我们建立了高效、敏感的preS／s(包含RT全基因序列)区扩增方法，可同时检测船vRT全基因和前c区所有突变；对I玎耐药突变的检测敏感性达到了100Ⅳ／ml，筮国医公丛测庄鎏鳆筮盛丝!至里Q!!型』世≥握直工2仝熬量级；克服了高病毒载量耐受的难题，可同时检测病毒载量相差1亿倍的样本。2．建立了大样本患者的HBV序列数据库：包含6800余例来自全国各地耶V感染患者的临床相关资料，11000余条耶V功能序列信息，并具有相似性检索、基因型分析、耐药

6、位点分析、前C／BcP区分析、CTL表位分析等多种生物信息学分析功能。3．阐明HBV基因型／亚型在华北地区的分布情况：对2377例患者进行基因型／亚型分型，检出的阳3V基因型有B、C、D三种，分别占83．8％(1992／2377)、15．5％(368／2377)和O．7％(17／2377)。基因亚型的例数与在所有患者中的比率为B110例(O．4％)，B2344例(14．5％)，B36例(0-3％)，B48例(0．3％)，C128例(1．2％)，C2例1937(81．4％)，C3例21(O．9％)，c46例(0．3％)。B基因型中以B2占绝大多数(3删368，93．5％)；C型中以C

7、2占绝大多数(1937／1992，97．2％)；未发现其它基因型。华北地区各省市之间舳V基因型／亚型分布特点类似。‘4．阐明HBv基因型／亚型与疾病转归的关系：a．不同基因亚型患者的性别比例、珈BVDNA载量、削LT、AST、TBIL、CHE、PTA、PTT值之间的差别无统计学意义。b．拉米夫定(I，AM)相关耐药突变位点m。80I、rtVl73L、m。180M、rtM204I、m舵04V的突变发生率均为C2高于B2，除M204V位点外，其余位点突变率的差异均有统计学