乙型肝炎患者外周血单个核细胞中hbv-dna检测的临床意义

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1、乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV-DNA检测的临床意义作者：张平，曹宁芬，袁迎春，张栩，李玉芳，焦运，【摘要】：目的研究HBV感染者血清及外周血单个核细胞（PBMC）中HBV-DNA的感染情况。方法采用荧光定量PCR技术对112例乙肝患者PBMC及血清中HBV-DNA的感染情况进行检测。结果PBMC内HBV-DNA阳性60例，阴性52例；PBMC内HBV-DNA阳性患者HBeAg阳性率68.3%，较PBMC内HBV-DNA阴性患者显著增高（P＜0.05）；血清和PBMC检测结果一致的患者占总检出率的79.5%。

2、肝硬化组PBMC内HBV-DNA阳性率高于急性乙型肝炎组和慢性肝炎组（P＜0.05）。结论血清与PBMC内HBV-DNA阳性率以及HBeAg阳性率存在明显的相关性。PBMC中HBV-DNA的持续存在可能与乙肝易慢性化有关。【关键词】乙肝病毒；肝硬化；HBV-DNA；外周血单个核细胞　　Abstract：ObjectiveToexploretherelationshipbetweeninfectionratesinserumandPeripheralBlood.MononuclearCells(PBMC)inHBVp

3、atients.MethodsHBVinfectioninserumandPBMCwereMonitoredbyPCRfluorescentquantificationtechnique.ResultsIn112HBVpatients，60werefoundHBV-DNApositiveinPBMC.InthosecaseswithHBV-DNApositiveinPBMC，68.3%were8HBeAgPositive，thatwassignificantlyhigherthanthoseHBV-DNAnegat

4、iveinPBMC(P＜0.05).Thesameresultinboth.serumandPBMCoccurredin79.5%ofallcases.PBMCinfectionrateinliver.sclerosispatientswassignificantlyhigherthanthatinacuteHBVandchronicHBV(P＜0.05).ConclusionThereisahighcorrelationamongtheHBV-DNApositiveratesinserumandPBMCandth

5、epositiverateofHBeAg.ThecontinuousexistenceofHBV-DNAinPBMCofHBVpatientsmayplayasignificantroleinthediseasemechanism.　　Keywords:HBVvirus;PBMC;HBV-DNA;sclerosis乙型肝炎的发病是乙型肝炎病毒（HBV）与机体相互作用的结果，与HBV引起宿主细胞的免疫病理损伤有关。HBV能感染外周血中单个核细胞（PBMC）并能在细胞内复制。HBV侵入人体后，机体免疫系统有可能及时清除

6、血液中HBV，但PBMC中HBV不易被清除而持续存在，可导致免疫功能异常引起肝病慢性化。探讨PBMC中HBV-DNA存在情况和含量变化对阐明HBV入侵PBMC及慢性化机制有重要意义。　　1材料与方法　　1．1病例选择8　　我院2008年1-6月收治的住院患者112例，男79例，女33例，年龄15～65岁，平均（31±22）岁。病程6～106个月。诊断符合西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准［1］，其中慢性乙型肝炎（CAH）57例，乙型肝炎肝硬化（LC）36例，急性乙肝（AHB）19例，均排除甲、丙、丁、戊型

7、肝炎。采用荧光定量PCR技术对上述肝病患者外周血PBMC及血清中HBV-DNA的感染情况进行检测。　　1．2试剂和仪器　　采用美国PE公司荧光定量PCR仪（GENEAMP5700Sequencedetectionsystem）、净化公司超净工作台、北京医用离心机厂低速离心机、日本日立公司SANYO型低温冰箱、美国贝克曼自动生化分析仪。TagDNA聚合酶购自晶美生物制品公司，荧光定量试剂盒购自深圳达安基因公司。　　1．3外周血PBMC内HBV-DNA检测(单个核细胞HBV-DNA)8　　无菌采集空腹静脉全血5mL放入

8、含EDTA2Na抗凝试管中，常规Ficoll梯度离心法分离外周血单个核细胞。为排除血清污染、最后一次洗涤液留送PCR法检测HBV-DNA。离心10000r/min，留取沉淀物，-20℃保存，PBMC沉淀和末次洗涤液分别加入50μLDNA提取液混匀，100℃沸水浴10min，转至4℃静置6～8h，离心5min，取上清液5μL做PCR反应。　　1.4血清HBV-