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时间:2018-08-01
《乙型肝炎患者外周血单个核细胞中hbv-dna检测的临床意义》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV-DNA检测的临床意义作者:张平,曹宁芬,袁迎春,张栩,李玉芳,焦运,【摘要】:目的研究HBV感染者血清及外周血单个核细胞(PBMC)中HBV-DNA的感染情况。方法采用荧光定量PCR技术对112例乙肝患者PBMC及血清中HBV-DNA的感染情况进行检测。结果PBMC内HBV-DNA阳性60例,阴性52例;PBMC内HBV-DNA阳性患者HBeAg阳性率68.3%,较PBMC内HBV-DNA阴性患者显著增高(P<0.05);血清和PBMC检测结果一致的患者占总检出率的79.5%。
2、肝硬化组PBMC内HBV-DNA阳性率高于急性乙型肝炎组和慢性肝炎组(P<0.05)。结论血清与PBMC内HBV-DNA阳性率以及HBeAg阳性率存在明显的相关性。PBMC中HBV-DNA的持续存在可能与乙肝易慢性化有关。【关键词】乙肝病毒;肝硬化;HBV-DNA;外周血单个核细胞 Abstract:ObjectiveToexploretherelationshipbetweeninfectionratesinserumandPeripheralBlood.MononuclearCells(PBMC)inHBVp
3、atients.MethodsHBVinfectioninserumandPBMCwereMonitoredbyPCRfluorescentquantificationtechnique.ResultsIn112HBVpatients,60werefoundHBV-DNApositiveinPBMC.InthosecaseswithHBV-DNApositiveinPBMC,68.3%were8HBeAgPositive,thatwassignificantlyhigherthanthoseHBV-DNAnegat
4、iveinPBMC(P<0.05).Thesameresultinboth.serumandPBMCoccurredin79.5%ofallcases.PBMCinfectionrateinliver.sclerosispatientswassignificantlyhigherthanthatinacuteHBVandchronicHBV(P<0.05).ConclusionThereisahighcorrelationamongtheHBV-DNApositiveratesinserumandPBMCandth
5、epositiverateofHBeAg.ThecontinuousexistenceofHBV-DNAinPBMCofHBVpatientsmayplayasignificantroleinthediseasemechanism. Keywords:HBVvirus;PBMC;HBV-DNA;sclerosis乙型肝炎的发病是乙型肝炎病毒(HBV)与机体相互作用的结果,与HBV引起宿主细胞的免疫病理损伤有关。HBV能感染外周血中单个核细胞(PBMC)并能在细胞内复制。HBV侵入人体后,机体免疫系统有可能及时清除
6、血液中HBV,但PBMC中HBV不易被清除而持续存在,可导致免疫功能异常引起肝病慢性化。探讨PBMC中HBV-DNA存在情况和含量变化对阐明HBV入侵PBMC及慢性化机制有重要意义。 1材料与方法 1.1病例选择8 我院2008年1-6月收治的住院患者112例,男79例,女33例,年龄15~65岁,平均(31±22)岁。病程6~106个月。诊断符合西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准[1],其中慢性乙型肝炎(CAH)57例,乙型肝炎肝硬化(LC)36例,急性乙肝(AHB)19例,均排除甲、丙、丁、戊型
7、肝炎。采用荧光定量PCR技术对上述肝病患者外周血PBMC及血清中HBV-DNA的感染情况进行检测。 1.2试剂和仪器 采用美国PE公司荧光定量PCR仪(GENEAMP5700Sequencedetectionsystem)、净化公司超净工作台、北京医用离心机厂低速离心机、日本日立公司SANYO型低温冰箱、美国贝克曼自动生化分析仪。TagDNA聚合酶购自晶美生物制品公司,荧光定量试剂盒购自深圳达安基因公司。 1.3外周血PBMC内HBV-DNA检测(单个核细胞HBV-DNA)8 无菌采集空腹静脉全血5mL放入
8、含EDTA2Na抗凝试管中,常规Ficoll梯度离心法分离外周血单个核细胞。为排除血清污染、最后一次洗涤液留送PCR法检测HBV-DNA。离心10000r/min,留取沉淀物,-20℃保存,PBMC沉淀和末次洗涤液分别加入50μLDNA提取液混匀,100℃沸水浴10min,转至4℃静置6~8h,离心5min,取上清液5μL做PCR反应。 1.4血清HBV-
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