多重pcrhcv基因分型和临床关系探究

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1、多重PCRHCV基因分型和临床关系探究【摘要】目的：研究不同基因型丙型肝炎病毒感染后丙肝患者的临床特征。方法：运用多重PCR(RT-PCR和NESTED-PCR),使la、lb、2a、2b和3o在一管内扩增，对93例血清HCVRNA21.0X103拷贝/ml的标本，设计HCV的C区特异性引物，采用Trizol浓缩RNA进行单管巢式PCR分型，并对不同基因型患者的临床资料进行比较。结果：①HCVlb在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中，分别为70%(14/20)、64.06%(41/64)、71.43%(5/7),HCV2a所占比例分为25%(

2、5/20)、23.44%(15/64)、14.29%(1/7),HCVlb/2a混合型所占比例分别为5%(1/20)、7.81%(5/64)、14.29%(l/7)o②在ALT2150U/L的患者中，HCVlb占54.84%(34/62),HCV2a占23.81%(5/21)。结论:HCVlb在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中占绝对优势，HCVlb患者肝损伤重于HCV2a患者。【关键词】丙型肝炎病毒；基因型；多重PCR【中图分类号】R450【文献标识码】A【文章编号】1004-7484(2012)13-0109-02HCV是一种全球性传染的

3、、给人类建康带来极大威胁的病原体。我们运用多重PCRHCV基因分型技术[1],对乐山地区93例HCVRNA21.0X103拷贝/ml的血清标本进行了基因分型，探讨丙肝患者基因分型与感染途径的关系，了解不同临床类型丙肝患者HCV基因型分布和频率。1资料与方法1.1血清标本93例我院2010年1月至2010年10月门诊及住院患者抗-HCV阳性及HCVRNA阳性血清标本，年龄5-84岁，男67例，女26例。阴性对照为HCVRNA阴性血清6例。1.2试剂仪器抗-HCV检测采用上海科华的ELISA检测试剂盒，酶标仪为BI0-RAD680,基因扩增仪为

4、DA7600,荧光定量检测为达安基因提供的配套试剂盒，其他试剂自备。1.3方法先对血清标本进行抗-HCV0D值的测定和荧光定量PCR检测，93例均是阳性的血清参照文献［1］进行基因分型。1.4统计学分析样本均数以x_±S表示，均数、率比较采用u、x?检验。2结果不同临床类型丙型肝炎患者基因分布及比率见表lo可见，HCVlb在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中中的百分比远远高于其他基因型，说明丙肝患者主要感染HCVlboHCVlb、HCV2a型丙肝患者临床资料比较见表2。HCV分型与性别和年龄无密切关系。HCVlb患者ALT高水平比例明显大于H

5、CV2a患者，说明肝损伤重于HCV2a患者。不同型别抗HCV0D值在22的范围内检出率不等，HCV2a型明显高于HCVlb型。3讨论HCV是引起人类急慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一［2］。HCVRNA基因分型目前常使用的检测方法较多，如直接测序、LiPa、酶切法及引物特异性电泳法等，由于方法学较为复杂［3-10］,因此该基因分型主要在较大的专科医院开展，基层医院无法展开。我们将多重PCR引物特异性分型方法运用到临床工作中，简单快速地对乐山地区93例丙肝阳性血清进行了分型。研究表明，HCV分型与性别和年龄无密切关系。HCV感染后其临床表

6、现轻重与感染基因型有一定关系。我们比较了lb和2a患者的临床资料，HCVlb患者在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中占绝对优势，ALT高水平比例明显大于HCV2a患者，说明肝损伤重于HCV2a患者。不同型别抗HCV0D值在$2的范围内检出率不等，HCV2a型明显高于HCVlb型，这可能与HCVlb型病毒株免疫原性比HCV2a型病毒株免疫原性低的缘故。由于HCV基因型与肝病严重程度有着密切的关系，并且对抗病毒治疗产生很大影响，因此，HCV基因分型可为HCV感染者的诊断和治疗提供重要的科学依据［11］。通过临床资料，我们发现：手术和输血是丙肝感染

7、的重要途径，而频繁血透和静脉吸毒也是丙肝感染的主要来源[12]o我们还发现了lb/2a混合型感染3例,其中2例为反复大量输注血制品，一例为多次血液透析导致。这是由于HCV免疫原性低下，感染后诱发的免疫力低下，时间短。不同型之间无交叉免疫保护，所以HCV可再次或混合感染。正是由于HCV存在输血及非输血多种途径的感染，严格规范手术及血透等创伤性医疗操作，器械及设备的严格消毒就尤为重要。应加强对高危人群的预防监测，加强献血员的病原学筛查，加强对疾病的宣传控制。参考文献[1]庄辉•重视丙型肝炎的研究[J].中华肝脏病杂志，2004,12(2)：65

8、[2]陈玮，谢祥红.多重PCRHCV基因分型检测方法的建立及初步应用[J]..传染病信息,2007,(20)；3[3]ChooQL,KuoG,WeinerAJ,etal.Isol