组蛋白去乙酰化酶抑制剂saha诱导多发性骨髓瘤细胞株u266细胞凋亡及其机制研究

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1、厦门大学硕士学位论文组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡及其机制研究姓名：于涛申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：张鹏201206摘要目的：研究辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylallilidehydrox鼬icacid，SAHA)对多发性骨髓瘤细胞株U266细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其可能机制。方法：采用台盼蓝拒染法、四氮唑蓝(MTT)比色法检测SAHA对U266细胞增殖的影响；Hoechst33342染色检测凋亡细胞的形态；AmexinV和PI染色后应用流式细胞仪检测S-吼～作用U266细胞的凋亡率；W-eStem-b10t方法检测组蛋白H3乙酰化

2、水平、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂p2l蛋白表达水平以及p38MAPK信号通路相关蛋白表达水平。结果：台盼蓝拒染法和四氮唑蓝(MTT)比色法均显示，SAHA可明显抑制U266细胞增殖，且具有时间剂量依赖性；Hoechst33342染色在荧光显微镜下可见S趾iA处理组细胞胞核出现明显的核固缩、核碎裂的情况，出现较多量的凋亡细胞；利用AnnexiIlV伊I双标法经流式细胞仪检测不同浓度的S趾认(0．5、1、2、4umol／L)作用U266细胞凋亡率24h分别为(2．83±0．87)％、(10．00±0．87)％、(18．97±1．19)％和(31．47±1．66)％，48h分别为(10．37±O

3、．65)％、(24．33±2．11)％、(30．37±2．97)％和(57．7±2．45)％，呈时间剂量依赖性。Wrestem—blot结果显示U266细胞经SAHA处理后，U266细胞组蛋白H3乙酰化水平及p21蛋白表达水平升高，呈现时间剂量依赖性。p38MAPK通路相关蛋白表达水平无明显改变。结论：SAHA抑制多发性骨髓瘤细胞株u266细胞增殖并诱导凋亡，SAHA可以促进组蛋白H3乙酰化水平升高，并且促进p21蛋白表达增加。SAHA对U266细胞p38MAPK信号通路不产生影响。关键词：SAHA；U266细胞；增殖抑制；凋亡；乙酰化H3；p21；p38MAPKA夙妇cfAbstracto

4、BtⅢCTIVE：ToinVestigatethee髓ctsofsubcmylallilidehydrox锄icacid(SAHA)onproliferationandapoptosisofmultiplemyelomaceUlineU266cellsinVitro锄deXplorcitspossiblemechanism．METHoDS：Thecellproliferationw鹤meaSu鹏dby缸ypanblueexclusionmemodandMTTaSsay；the印optoticmoqphologi谢ch朋gew嬲observed嘶thHoechst33342staining；t

5、heAnnexinVandPImlilling、Vasusedtodetecttheapoptoticratesbynowc”ome时；theexpressionofaCe锣l—H3aIldcyClin-dependentl【inaseinllibitorp21proteinas、vellaSthep38ML”K-aSsociatedprotein、ⅣeredetectedbyWbstem．blot柚alysis．RESULTS：呻paIlblueexclusionaSsay锄dMTTaSsaysimul切neousindicatedmeproliferationra瞳eofU266cell

6、swasdecreaSedinSAHA-骶atedgroupinatirne-dosed印endentmanner．ObViouSkaryopyknosisandnuclear仔鹎mentaIionaswell嬲alotofapoptoticcellscouldbeseeniIlSAHA-treatedgrouptlⅡou曲fluorescencemicroscopebyHoechst33342staining．Andme舢mexinV锄dPIstainingshowedSAHAcaIlinduceapoptosisofU266cells，仃e釉ent晰thSAHA(O．5、l、2a11d4

7、岫。忱)for24h，theapoptoticratesofU266cellswere(2．83士0．87)％、(10．OO士0．87)％、(18．97士1．19)％and(31．47士1．66)％respectiVely，臼I：a缸nentwitllSAHA(O．5、l、2a11d4啪ol／L)for48h，theapoptoticmtesofU266cells、Ⅳere(10．37士O．65)％、(24．