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时间:2018-11-21
《velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株u266细胞凋亡研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、Velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡研究作者:陈丽娟,李建勇,钱思轩,朱广荣,郑文娟【摘要】 为了研究velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡效应及机制,采用台盼蓝拒染法检测2、10、50和100nmol/Lvelcade处理U266细胞活率,用流式细胞术分析Annexin-V、线粒体跨膜电位(Δψm)和氧自由基(ROS),用半定量RT-PCR法检测bcl-2mRNA的表达。结果表明:velcade抑制U266细胞增殖;诱导U266细胞凋亡,24小时Annexin-V阳性细胞比例增高,△ψM降低;12小时时活性氧明显
2、增高,荧光强度增强;抗凋亡基因bcl-2表达降低。结论:velcade对U266细胞具有增殖抑制和杀伤作用,其可通过内源性细胞凋亡信号通路诱导U266细胞凋亡。【关键词】velcade;多发性骨髓瘤;细胞凋亡 MultipleMyelomaCellLineU266ApoptosisInducedbyVelcade AbstractToinvestigatetheeffectofvelcadeonmultiplemyelomacelllineU266apoptosisanditsmechanism,cellviabilityatedbytryp
3、anbluedyeexclusion.Annexin-V,mitochondrialtransmembranepotential(Δψm)andreactiveoxygenspecies(ROS)labeledbyDCFHDAinedbyfloetry,theexpressionofbcl-2mRNAi-quatitativeRT-PCR.Theresultsshoorphologiccharacteristicsofapoptosis.Velcadeat50nmol/LincreasedAnnexinVpositivityandfluoresc
4、enceintensityofDCFbecauseofROSgenerationofU266cells.Expressionofanti-apoptoticgenebcl-2mRNAalsodecreased.Itisconcludedthatvelcadeinhibitethegroultiplemyeloma;apoptosis多发性骨髓瘤(MM)是一种浆细胞克隆性增生的血液系统恶性肿瘤,多发生于老年人。随着社会人口的老龄化,其发病率呈逐渐增高的趋势。几十年来对MM一直采用激素和细胞毒性药物联合治疗,尽管近年来加用反应停抑制血管新生治疗或采用
5、自体骨髓移植治疗,但其仍是一种不可治愈的血液系统肿瘤。由此可见,开发新的治疗方法有重要的临床价值。蛋白酶体抑制剂近年来作为MM新的治疗制剂用于临床试验,本研究就临床新药蛋白酶体抑制剂velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞的凋亡作用进行探讨。 材料和方法 细胞培养 U266细胞置于含10%的热灭活胎牛血清的RPMI1640培养液(Gibco公司产品)中,于37℃、5%CO2和95%空气湿度条件下进行培养。实验过程中,细胞以(2-5)×105细胞/毫升的密度接种培养,并与不同浓度velcade一起进行孵育,对照加DMSO。细胞活率由台
6、盼蓝拒染法检测,根据处理组存活细胞数与死细胞数的比例来计算。形态学观察,细胞用cytospin(Shandon,Runcorn,UK)收集至载玻片,用瑞氏染液染色并置于光学显微镜下观察。每次试验重复3次。生长抑制率及细胞活率按如下公式计算:生长抑制率=[(对照组细胞数-处理组细胞数)/对照组细胞数]×100% 存活率=[活细胞数/(活细胞数+死细胞数)]×100% Annexin-V、线粒体跨膜电位(Δψm)和氧自由基(ROS)的流式细胞仪分析 Annexin-V分析 使用FITC标记的AnnexinV和PI双染法检测细胞凋亡,根据Bect
7、onDickinsonBiosciences公司提供的说明书进行操作。简单地说,取(1-2)×105细胞,经PBS漂洗后加100μl结合缓冲液,重悬细胞,加5μlAnnexinV-FITC,10μlPI避光孵育15分钟后加400μl结合缓冲液,用流式细胞仪检测。 线粒体跨膜电位(Δψm)检测 取5×105细胞,用PBS清洗1次,加入10μg/mlRh123(Sigma公司产品)37℃孵育30分钟,用PBS漂洗1次,加入终浓度10μg/mlPI4℃暗处放置30分钟,用流式细胞仪检测。活性氧测定细胞内活性氧测定方法参照 结果 velcade对
8、U266细胞增殖抑制和杀伤作用 研究结果表明,velcade可以抑制U266细胞的生长,同时伴有细胞活率的降低。U266细胞经2、10
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