鳞茎贮藏时间对诱导大蒜四倍体植株的影响

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1、山东农业大学硕士学位论文鳞茎贮藏时间对诱导大蒜四倍体植株的影响姓名：孙齐申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：刘世琦20120611山东农业大学硕士学位论文中文摘要大蒜种质资源丰富、优良品种众多，但由于长期采用无性繁殖，不能进行杂交育种，其遗传学和生物学多样性未得到充分利用，也有一些优良的品种因种性退化而濒临灭绝。利用多倍体诱导技术培育的多倍体蔬菜，无论是抗逆性，抗病性，还是品质方面与二倍体相比均存在很多优势，为蔬菜优质高产育种开辟了一条重要的途径。利用愈伤组织诱导植株又称为大蒜快繁技术，是近年来为提高大蒜繁殖系数，提纯复壮，避免种性退化，得到迅猛发展的一项新技术，现已得到以大蒜茎尖，气生

2、鳞芽等为外植体的通过愈伤组织诱导出的不定芽体系。在大蒜快繁技术的基础上利用秋水仙素诱导大蒜四倍体再生体系是大蒜多倍体育中的新途径。‘‘大蒜自6月份收获，经历后熟：休眠后，到9月份由于夜间温度下降，蒜鳞茎开始解除休眠。大蒜在贮藏过程中，鳞茎薄壁细胞衰退，其营养物质供给幼芽萌发生长，伴随着幼芽的不断生长，鳞茎逐渐进入衰亡过程，营养物质含量下降，酶活性降低。因此寻找大蒜整个贮藏时期的最佳微繁扩繁时间有着重要的意义，但目前关于这一方面的报道还不多见。试验于2009．2011年在山东农业大学科技创新园和农业部园艺作物重点开放试验室进行。研究探讨了，大蒜愈伤组织诱导及增殖分化的影响因素，建立了大蒜愈伤组

3、织诱导、增殖及器官分化的培养体系，在此基础上分别研究了贮藏时间和秋水仙素对大蒜再生体系的影响，并进一步开展了贮藏时间与秋水仙素对大蒜四倍体再生体系的互作效应研究。主要研究结果如下：1．影响大蒜愈伤组织诱导的因素：．鳞芽茎盘、基部及茎尖诱导的愈伤组织出愈量较高，出愈率高，为大蒜外植体的最优选择：与此相比鳞茎中部诱导的愈伤组织质量较差，出愈率较低，作为外植体效果不理想。选用外植体的基因型及规格对大蒜愈伤组织的再生影响较大，最佳选择为苏联蒜0．3xO．2×0．2em规格的外植体。抗生素可有效减少大蒜愈伤组织生长过程中的染菌率。愈伤组织诱导最佳光照条件为黑暗处理，继代培养及分化最佳光照度为36gmo

4、l·m-2,s～(16h／d)。试验表明，较高浓度的生长素和较低浓度的细胞分裂素组合有利于苏联蒜鳞芽愈伤组织的诱导，但并不利于其分化。其中，2，4．D对愈伤组织的发生起决定作用，鳞茎贮藏时间对诱导大蒜四倍体植株的影响MS+2．0mg／L2,4一D+1．0mg／L6-BA有利于大蒜愈伤组织的产生，MS+2．0mg／LNAA+1．0mg／L6-BA较适宜于愈伤组织增殖和芽分化，无激素的培养基利于生根。2．贮藏时间对大蒜再生体系的影响本试验采用收获后不同贮藏时间的大蒜鳞茎作为外植体进行组织培养，研究了贮藏时间对大蒜诱导愈伤组织，诱导脱分化不定芽，不定根的生成以及鳞芽诱导不定芽的影响。结果表明，在大

5、蒜收获后贮藏期间，外植体的出愈率、出愈量、胚性愈伤组织率，分生不定芽的直径、发芽率、平均发芽数，分生不定根的生根率、平均生根数，以鳞茎基部及茎尖诱导不定芽的发芽率、平均发芽数的最高点出现在收获后61～122d(即大蒜打破休眠幼芽萌动时期)。3．秋水仙素对大蒜再生体系的影响以经秋水仙素浸泡的大蒜鳞芽为外植体，建立大蒜四倍体无性繁殖体系。结果表明，鳞芽基部为诱导四倍体不定芽的最适外植体；进行四倍体诱导的最佳处理为O．1％的秋水仙素浸泡36h，其不定芽诱导的适宜培养基为MS+2．0mg／L2,4一D+1．0mg／L6-BA，不定芽生根的最适培养基为基本MS培养基。4．贮藏时间对大蒜四倍体再生体系的

6、影响本试验采用收获后不同贮藏时间的大蒜鳞茎作为外植体进行组织培养，研究了贮藏时间对大蒜诱导四倍体植株(愈伤组织，诱导脱分化不定芽，不定根的生成以及鳞芽诱导不定芽)的影响。研究发现贮藏时间对大蒜四倍体再生植株的影响与大蒜再生植株的影响一致，呈明显的先上升后下降趋势，但染色体变异植株占总发芽植株的百分比变化比较平缓。由于经长期培养的愈伤组织常常会分化出变异植物，即体细胞无性系变异。因此大蒜经愈伤组织途径生成的再生植株变异率较高，但四倍体生成率较低。然而，由于秋水仙素直接作用于外植体对再生植株的染色体加倍效果较明显，所以经不定芽组织途径生成的再生植株变异率较低，但四倍体生成率较高。关键词：大蒜；贮

7、藏时间；四倍体；再生体系ⅡEffectofBulbStorageDurationontheInductionofGarlicTetraploidPlantAbstractTherearevariOUSgarlicresources．However，becauseofthelong-termasexualreproductionthatcannotbeCROSS．breeding，garlicgenetican