激素对魔芋球茎愈伤组织诱导和植株再生的影响

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1、激素对魔芋球茎愈伤组织诱导和植株再生的影响　　以魔芋球茎为外植体，采用附加不同种类和浓度的生长素、细胞分裂素的MS培养基，研究激素对魔芋愈伤组织诱导、生长和分化的影响。结果表明：在适量的生长素配合作用下，6-BA浓度为1.5mg/L，有利于球茎愈伤组织诱导增殖，浓度增加为2.0mg/L，则有利于芽的分化；6-BA浓度一定时，生长素浓度较高，愈伤长势旺盛，但分化出苗较慢，生长素浓度偏低，愈伤增殖较慢，但芽分化较快。分析了不同种类激素的作用效果，认为适合花魔芋球茎植株再生的最适培养基是MS+6-BA1.5～2.0mg/L+

2、NAA0.1～0.5mg/L。　　关键词魔芋；球茎；组织培养；激素　　S632.3A1007-5739（2014）22-0067-02　　EffectofHormoneonCallusInductionandPlantRegenerationfromCormExplantsofAmorphophalluskonjac　　XUXiao-yanTANGS培养基，研究自育魔芋新品系M26的最佳诱导培养基，为进一步完善魔芋组培技术以及M26的组培扩繁提供依据。　　1材料与方法　　1.1试验材料　　试验材料为花魔芋新品系M26球

3、茎。　　1.2愈伤组织诱导和增殖培养　　球茎用自来水冲洗干净后晾干，在无菌操作台内去皮，切成较大的组织块，放在75%酒精中浸泡1min，转入0.1%HgCl2中进行表面消毒12min，用无菌水冲洗3次，切成1.0cm1.0cm0.5cm的小块（每块约重0.5g），接种在8种不同的诱导培养基上（表1，MS基本培养基附加不同的激素组合，pH值6.0，蔗糖浓度30g/L，琼脂7.8g/L，每瓶培养基容量为30mL）。每处理接种12瓶，每瓶5个外植体，3次重复。外植体接种后在25℃室温的电热培养箱中暗培养30d后，不切割转接到

4、相同的新鲜培养基上继代增殖。培养20d时调查愈伤诱导率，60d时调查芽分化率和愈伤块重。　　1.3芽点分化培养　　将上述不同培养基上诱导形成的愈伤组织切割成0.5cm见方的小块，转入MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L的统一分化培养基中，进行愈伤组织继代和芽点分化培养。培养温度（25±2）℃，光照时间12h，光照强度1500～2000lx，培养30d时调查不定芽诱导率、无效愈伤百分率（愈伤组织在继代培养过程中褐变死亡或呈水渍状萎缩不生长的愈伤，该文通称为无效愈伤）。　　1.4再生植株的培养及

5、生根　　将继代分化培养中形成的不定芽带一定愈伤组织切割转入壮苗生根培养基1/2MS+IBA0.05mg/L上培养，培养温度（25±2）℃，光照时间12h，光照强度1500～2000lx。未形成不定芽的愈伤组织切割后在新鲜分化培养基上继续分化培养。　　2结果与分析　　2.1愈伤组织诱导和生长　　从表1可以看出，8种不同配方均能诱导愈伤形成，多数外植体接种1周后开始增厚，20d在切口表面形成一层很薄的白色愈伤组织，并不断增殖，逐渐膨大呈瘤状，颜色也不断加深，一般位于外植体上部的愈伤为淡黄色或粉红色，靠近培养基

6、底部的愈伤为棕红色。不同配方的愈伤诱导率不同。8种培养基中，MS8、MS5、MS4、MS3诱导率均高达95%以上，显著高于其他4种配方；其次是MS6和MS7，分别为84.0%和81.4%；MS1和MS2较低，分别为67.5%和72.8%。　　愈伤组织在原诱导培养基上均可以生长增殖，但不同培养基上愈伤组织生长速度并不一致。培养60d后，外植体的重量由初次接种的0.5g增加到1.2～2.0g，重量增加了1～3倍。MS5、MS6、MS7等培养基增殖较快，显著优于其他培养基，其中增殖最快的是MS5，可能是加入了2，4-D的缘故

7、。　　在6-BA浓度为1.5mg/L的培养基中，球茎愈伤诱导率普遍较高，增殖较快，说明采用该浓度有利于魔芋球茎愈伤组织的诱导和增殖，这一结果与陈永波等[3]的研究结果一致。　　2.2不同诱导培养基形成的愈伤组织分化能力比较　　将诱导培养基上得到的愈伤组织转入到统一的分化培养基上进行分化培养，部分愈伤组织继续增殖，并继续分化形成不定芽或根；部分愈伤组织只增殖，未见芽点分化出现；还有部分愈伤组织褐化坏死或停止生长。从表2可以看出，MS2、MS3、MS7、MS8等配方芽分化早，接种60d后即有少量芽点出现；MS6则过早出现根

8、器官，说明培养基中的NAA浓度过高；MS4、MS5、MS6等6-BA浓度为1.5mg/L的培养基上形成的愈伤在分化培养中长势旺盛，褐变轻，但分化速度较慢，分化率偏低；MS7、MS8等6-BA浓度为2.0mg/L的培养基，其愈伤组织增殖相对较慢，但分化快，分化率高，同时培养基褐变较重，可添加PVP控制褐变。　　总之，该试验球茎愈伤组