无籽西瓜愈伤组织诱导及植株再生的研究

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1、河南农业大学硕士学位论文无籽西瓜愈伤组织诱导及植株再生的研究姓名：郑先波申请学位级别：硕士专业：果树学指导教师：夏国海20030601致谢本论文是在导师夏国海教授的悉心指导和严格要求下完成的。从论文的选题、设计、工作安排到论文的撰写与修改，恩师都给予了精心的指导和帮助。恩师渊博的知识、严谨的治学态度、开拓创新的学者风范和孜孜不倦的敬业精神都给我留下了深刻的印象，是我人生的楷模。三年来，无论是在学习上，还是生活上，恩师都给予了无微不至的关怀，在此表示最衷心的感谢!本课题在开题论证中，崔红副研究员、何松林教授、朱道圩教授、李靖副教授、陈延惠副教

2、授、宋尚伟副教授、孙治强教授、王吉庆副教授、张绍文教授等都提出宝贵意见。林园学院高级实验师任凝辉老师、张惠梅老师自始至终密切关注着试验的进展情况，在整个试验过程中，给予了大量的指导和帮助，在此致以最真诚的谢意!感谢河南农业大学园艺技术公司总经理马长生副教授和中国农业科学院郑州果树研究所郑隆种业有限公司杨记磙研究员惠赠大量西瓜种子!师弟张恒涛、99级本科生孟伟、温文华、王增春同学参与试验并做了大量工作。在论文打印过程中，得到了师妹王静毅、2000级本科生李博、东方、郭琳的大力帮助，在此一并感谢!在三年的学习和生活中，得到林园学院、校研究生处各

3、位领导和园艺系各位老师的关心和帮助，在此表示衷心的感谢!感谢所有信任我、关心我的师长、朋友、家人，感谢对我人生和事业有所裨益的每一个人。郑先波2003年5月于郑州摘要重点对三倍体无籽西瓜成熟胚无菌萌发，愈伤组织诱导、继代、分化以及植株再生等进行了系统的研究，建立了高效愈伤组织扩繁体系，为无籽西瓜体细胞胚诱导、体细胞遗传变异特性及细胞工程研究奠定了基础。主要试验结果如下：1。无籽西瓜成熟胚消毒的最佳方案是先用75％酒精预消毒30s，然后用10％漂白粉+0．5％NaClO消毒30min，再用无菌水冲洗3--．5次。消毒胚平放于蛭石或琼脂培养基中

4、，先暗培养3d再转至培养室，胚萌发很快，无菌苗生长健壮。无籽西瓜不同品种与成熟胚的萌发生长没有必然的联系，只要给予适宜的光、温、水、气条件，不同品种的成熟胚均可正常萌发。2．适宜诱导愈伤组织的外植体是2～6d苗龄的无菌苗子叶和下胚轴，最佳培养基组合为MS+NAA1．0mg／L+BA0．5mg／L。无籽西瓜愈伤组织的产生首先需要黑暗条件的启动，其扩增与生长分化则需在光下进行；接种后直接进行光照处理，抑制愈伤组织形成。品种与愈伤组织诱导关系密切，在巳(I俗+NAA1．0mg／L+BA0．5mg／L)培养基中“黑蜜5号”是最易产生愈伤组织的品种，

5、可作为无籽西瓜体细胞诱导等方面研究的理想材料。3．不同糖源对无籽西瓜下胚轴愈伤组织诱导的作用存在显著差异，其中蔗糖效果最好，葡萄糖次之，乳糖和麦芽糖差异不明显，而山梨糖效果最差。蔗糖浓度影响无籽西瓜下胚轴愈伤组织的诱导，浓度超过3％时诱导率呈下降趋势；但适当提高蔗糖浓度有利于愈伤组织的进一步分化，能促进颗粒状愈伤组织的形成。从诱导率和愈伤组织质地综合考虑，蔗糖浓度以5％为佳。加速愈伤组织增殖时，可以适当降低蔗糖浓度，蔗糖浓度2％最有利于“黑蜜5号”无籽西瓜愈伤组织的继代扩增。4．愈伤组织芽分化的最佳培养基组合是MS+BA4．0mg／L+NA

6、A0．5mg／L，芽分化率高达75％。丛状芽诱导的理想培养基组合是MS+BA2．0mg／L+IBA0．5mg／L和MS+BA2．0mg／L+IBM．0mg／L，丛芽增殖倍数均超过8，有效芽率高达93．52％以上，基部没有愈伤组织产生。MS培养基中附加0．2mg／L，0．5mg／L，1．0mg／L的KT均可明显促进矮弱芽苗的生长发育。5．无根芽苗在附加IAA0．4mg／L或IBA0．3mg／L的1／2MS培养基中生根都很理想，生根率均达到t00％，平均根数在4．38条以上，且无根芽苗基部没有愈伤组织产生。生根苗先闭瓶炼苗6～8d，后移栽到经过

7、消毒的自然蛭石+草炭(1：2／V：V)中，移栽成活率可达97．5％以上。关键词：无籽西瓜，愈伤组织，植株再生，植物生长调节物质1文献综述1．1植物组织培养研究的发展简史植物组织培养(Planttissueculture)是20世纪发展起来的一项新兴生物技术，是现代生物工程的基础，是遗传转化、植物物种改良研究的基本环节之一。植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官(根、茎、叶、花、果实和种子等)、组织(如花药组织、形成层、胚乳和皮层等)、细胞(体细胞和性细胞)以及原生质体培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件使其长成完整檀株的过程

8、““7“1。植物组织培养技术经历了近百年辛勤探索的过程，现在许多植物的离体培养都获得成功。植物组织培养的发展简史如下：1838年，德国植物学家Schleident提出“植物细胞学