青蒿叶片愈伤组织的诱导和植株再生

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1、青蒿叶片愈伤组织的诱导和植株再生作者：伍晓丽，刘飞，李隆云，钟国跃【摘要】目的探讨以青蒿幼嫩叶片再生植株的方法。方法以青蒿幼嫩叶片为外植体，接种于附加不同激素组合的MS培养基，进行愈伤组织诱导和植株再生。结果以6BA0.1mg/L+2，4-D0.3mg/L诱导愈伤组织，在含6BA0.1mg/L+IAA0.3mg/L的培养基上分化，用含IAA0.1mg/L+NAA0.3mg/L的培养基生根。结论用以上方法可以在较短周期内从幼嫩叶片得到再生青蒿植株。　　【关键词】青蒿；植物激素；愈伤；再生　　Abstrac

2、t：ObjectiveToexploretheleavesofArtemisiaannuaL..MethodsToplanttheleavesofArtemisiaannuaL.onmediumsplusdifferentplanthormones.ResultsThesuitablecallus-inducingmediumg/L+2,4D0.3mg/L.Thesuitableregeneratingmediumg/L+IAA0.3mg/L.Thesuitablerootinducingmediumg

3、/L+NAA0.3mg/L.ConclusionYoungplantscanregeneratefromleavesinashortspanbythemethodabove.　　KeyisiaannuaL；Planthormones；Callus；Regeneration青蒿(Artemisiaannua)L．，又名黄花蒿，是菊科一年生药用草本植物。提取物青蒿素对脑疟疾和氯喹疟疾具有高效低毒的抗疟性能，g/L+NAA1.0mg/L　　1.2.2外植体处理　　　剪取20cm高青蒿苗上的幼嫩叶片，剪成0.5cm

4、2的小块，无菌水中浸泡3h，75%乙醇漂洗1min，于5%次氯酸钠溶液中浸泡3min，无菌水漂洗4次，接种。培养条件为25℃，2000Lx光照、14h/d。　　2结果与分析观察发现，不同激素组合对青蒿的愈伤诱导、植株再生和生根均有显著影响。　　2.1愈伤组织诱导　　　接种后的叶片呈灰绿色水浸状，貌似死亡，培养基（2）和（5）上的叶片，在接种后第5天叶片边缘开始出现鲜绿色的颗粒，直径约0.5～1.0mm左右，呈致密状态，10d后，愈伤生长达到高峰，在多处叶片边缘出现。培养基（5）上的愈伤在接种后15d开始分化

5、出绿色丛生芽点，但只停留在这一阶段，不能进一步分化成苗。培养基（2）上的愈伤一直保持致密颗粒状。培养基（1）（3）（4）（6）上的叶片没有愈伤出现，只是叶片边缘有少部分返绿，返绿部分取下接种于分化培养基上渐渐褐化死亡。不同培养基愈伤组织诱导率见表1。表1愈伤组织诱导率（略）　　2.2芽的分化　　　将培养基（2）和（5）上的愈伤分别转入分化培养基（7）（8）（9），5d后，（8）和（9）上的愈伤均分化出苗，10d后达高峰时期。（8）上的苗生长较正常，（9）上的苗丛生密度过大，苗型细弱，生长缓慢，（7）上的愈伤

6、只能保持在丛生芽点状态，30d后即渐渐褐化死亡。培养基（5）中产生的愈伤组织分化率明显大于培养基（2）中产生的愈伤组织。3种分化培养基中幼苗分化率结果见表2。表2培养基（2）和（5）上的愈伤组织幼苗分化率（略）　　2.3根的分化　　　小苗约1～2cm高时转入生根培养基，3d后即可在小苗基部见到白色新根，不同培养基根分化率如表3。表3幼苗根分化率（略）可见，随着NAA浓度增高，根分化率反而降低，以培养基（10）较合适。从叶片接种到小苗出瓶移栽，整个周期约1个月左右。此外，在实验期间还用培养了约2个月的青蒿无菌

7、苗叶片接种培养基（2）和（5），叶片在培养基上皱缩，边缘褐化，最后死亡，始终无愈伤出现。　　2.4试管苗移栽　　　试管苗揭去瓶盖，在室内炼苗3d，4h/d；3d后，置于室外弱光荫蔽处炼苗2d，4h/d；2d后，移栽已高压灭菌的珍珠岩，浇透定根水，每天叶面喷水保湿1～2次，约15d后，见苗基部长出乳白色新根，心叶开始生长，即表明成活，带土移栽大田。移栽成活率93%以上。　　3小结本实验的研究表明，以青蒿幼嫩叶片为外植体，MS培养基为基本培养基，附加6BA1.0mg/L+2,4D0.3mg/L诱导愈伤组织，

8、附加6BA0.1mg/L+IAA0.3mg/L的培养基上分化，附加IAA0.1mg/L+NAA0.3mg/L的培养基生根，可以在较短周期内从幼嫩叶片得到再生青蒿植株。该结果可应用于青蒿的生物技术育种，尤其是倍性育种上，具体思路如下：用秋水仙素溶液浸泡刚发芽的幼苗，幼苗在小花钵中生长，得到嵌和体植株，取生长初期的数片真叶（该叶片可能是多倍体组织），通过组织培养再生植株，得到纯合的多倍体植株。无菌苗叶片接种诱导培养