perifosine的抗白血病作用及慢性粒细胞白血病细胞株对其耐药机制的体外研究

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1、浙江大学硕士学位论文Perifosine的抗白血病作用及慢性粒细胞白血病细胞株对其耐药机制的体外研究姓名：刘燕燕申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：童茵20120223浙江大学硕士学位论文中文摘要Perifosine的抗白血病作用及慢性粒细胞白血病细胞株对其耐药机制的体外研究浙江大学医学院内科学(血液病)硕士研究生刘燕燕导师童茵副主任医师中文摘要第一部分：研究PRF对AML和CML细胞株的生长抑制及诱导凋亡的情况目的：研究和比较Pl讧对削ML和CML细胞株的生长抑制作用及诱导凋亡的情况。从而为进一步研究PI心的抗白血病作用机制打下基础。方法：M订法检

2、测PI强对白血病细胞株的生长抑制作用，AV／PI流式细胞检测术检测PI心诱导白血病细胞株的凋亡情况，Hoechst染色法观察PI讧诱导白血病细胞凋亡的形态学改变，w．estem-blot法检测PI强作用后c硒paSe一3，c硒paSe一9和P：fu圆蛋白的表达变化，Wrest咖．blot法检测白血病细胞株相关基因蛋白的表达情况。结果：(1)O～20

3、Jmo儿的PI江作用CML细胞株K562、K562／G以及AML细胞株KaS删．1、HL-6024小时后，IC50分别是121．74、311．3、11．08、11．14肿∞l／L，作用48小时后IC50分别是

4、56．28、141．75、4．24、3．62pmo儿。表明AML细胞株对PI冲敏感，而CML细胞株则不敏感。(2)10岬。儿的PI疆分别作用K562、II浙江大学硕士学位论文中文摘要K562／G、KasuIIli一1和HL．60细胞株24小时后，AV／PI流式术检测显示凋亡率分别为8．23％、7．37％、26．72％、25．80％，表明Pl强可显著诱导AML细胞株凋亡，而对CML细胞株不敏感。(3)10岬ol／L的PI疆作用24H后，AML细胞株跏啪i．1和HL．60的细胞核内可见明显的凋亡小体，而CML细胞株K562和K562／G中则未见凋亡小体，从形

5、态学上证明PI强可以诱导AML细胞发生凋亡，但基本不诱导CML细胞凋亡。(4)PRF诱导剐ML细胞凋亡时，caspa辩．3、c弱paSe．9、PIAI心蛋白激活，而CML细胞株的casp雒e．3、caSpase．9、脚则未见激活。(5)AML细胞株壬‰uIlli．1和HL．60在经PI强作用24小时后，AKT和P．AKT的表达有明显的下调，ⅢK和P．肿<可见明显的上调，而对PRF不敏感的CML细胞株K562和K562／G中这些蛋白的表达水平无明显变化。第二部分：研究CML细胞株对PRF耐药的机制以及自噬在其中的作用目的：进一步研究cML细胞株K562和K

6、562／G对PRF耐药的潜在机制，以及自噬在其中的作用。从而为CML的治疗提供更为有效的药物打下基础。方法：通过吖啶橙染色、透射电镜和LC3．GFP．K562荧光改变检测PRF诱导CML细胞K562产生自噬，WeStt釉-blot法检测PI强作用K562细胞后LC3及自噬相关蛋白的表达变化，MTT法检测Pl疆联合CQ对CML细胞株的生长抑制作用。结果：(1)PRF可以诱导cML细胞株发生自噬，且呈浓度依赖性。(2)PRF诱导CML细胞发生的自噬伴随At哥5的上调，却未见Beclin-1和A蟾．7的上调，为非Beclill．1依赖性的。(3)Pl强诱导cM

7、L细胞产生的自噬被抑制后，可以增强PRF对CML细胞的杀伤作用，表明该种自噬起保护性作用。rH浙江大学硕士学位论文中文摘要结论：PI强可以下调触，显著抑制AML细胞株l(a鲫【Ili．1和HL．60生长并诱导凋亡，但对CML细胞株K562和K562／G则无此作用。Pl强对CML耐药可能与其诱导CML细胞产生保护性自噬有关，该种自噬为非Beclm．1依赖性的，抑制自噬可以增强PI心对CML细胞的杀伤作用，诱导凋亡．关键词：白血病、P商fosine、细胞自噬、凋亡、becliIll、ATG5、ⅣAnti．1eukemiaeffectsofperifosine

8、andthemechanismofresistancetoperifosineinCMLceUsZhejiangUhiVersi够SchoolofMedicme111temalMedicine(Hematology)MasterCandidateⅥ咀一yanLiuSupervisor啊nTongAbstractSection1：PerifosinereducescenviabilityandinducesapoptosisinAMLandCMLcelllin鹤Alm：T0study觚dcomparec”otoxice虢ctsaIld印optosisi11

9、ducedbyAhi出bitorperifosineonCML觚dAMLcell