左旋紫草素对慢性粒细胞白血病的作用研究

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1、分类号：R733.72单位代码：10719学号：12123007密级：延安大学论文题目:左旋紫草素对慢性粒细胞白血病的作用研究论文作者：李星指导教师、职称：王岐山教授学科、专业名称：专业内科学提交论文日期：二〇一五年六月创新性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢中所罗列的内容以外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果；也不包含为获得延安大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的

2、说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。本人签名：日期：关于论文使用授权的说明本人完全了解延安大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属延安大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为延安大学。学校有权保留送交论文的复印件，允许查阅和借阅论文；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。（保密的论文在解密后遵守此规定）本学位论文属于保密在年解密后适用本授权书。本人签名：日期：导师签名：日期：缩略

3、词中英文对照表ABBREVIATIONS英文缩写英文全称中文全称FBSFetalbovineserum胎牛血清DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜PIPropidiumiodide碘化丙啶EBEthidiumbromide溴化乙锭DAPI4,6-diamidino-2-phenylindole4,6-二脒基-2-苯基吲哚MTT3-(4，5-dimethylthiazolzyl)3-（4,5-二甲基噻唑）-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide-2,5二苯基四唑溴ODOpticalden

4、sity吸光度PBSPhosphatebuffersolution磷酸缓冲液PCDProgressCellDeath程序性细胞死亡FCMFlowcytometry流式细胞术PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链反应RT-PCRReversetranscriptionPolymeraseChainReaction反转录聚合酶链反应PBMCPeripheralbloodmononuclearcell外周血单个核细胞左旋紫草素对慢性粒细胞白血病的作用研究专业内科学研究生李星指导老师王岐山教授摘要实验目的：通过

5、对左旋紫草素对白血病K562细胞、慢性粒细胞白血病原代细胞以及正常单个核细胞的作用的初步研究，拓展左旋紫草素在治疗慢性粒细胞白血病方面的潜在应用价值。实验材料与实验方法：左旋紫草素购买于上海万疆生物技术有限公司，分别选取1µmol/L、2µmol/L、3µmol/L作用于白血病K562细胞（由陕西省人民医院血液内科实验室用传统方法传代培养），在0h、12h、24h、48h时，倒置显微镜和荧光显微镜（DAPI染色）观察不同药物浓度作用时细胞形态变化；台盼蓝拒染法和MTT比色法检测不同药物浓度作用时的细胞增殖抑制率；流式细胞术检

6、测不同药物浓度细胞的凋亡率。另外收集5份临床初诊的慢性粒细胞白血病患者外周血及3份正常人外周血，分离单采后经Ficoll密度梯度离心法分离提取获得单个核细胞，选取2µmol/L、4µmol/L的左旋紫草素，分别作用于慢性粒细胞白血病原代细胞和正常单个核细胞，选取主要检测时间点为0h、24h、48h，台盼蓝拒染法检测不同药物浓度的单个核细胞增殖抑制率；利用实时定量PCR法检测不同药物浓度对慢性粒细胞白血病原代单个核细胞的BCR/ABL融合基因P210表达的影响。实验结果：1.倒置显微镜和荧光显微镜（DAPI染色）下观察左旋紫草

7、素作用白血病K562细胞24h后细胞的形态变化：不同浓度左旋紫草素（1µmol/L、2µmol/L、3µmol/L）作用于K562细胞24h后，对照组细胞形态完整，折光性良好；药物浓度1µmol/L可见少数细胞发生肿胀，形态变得不规则；药物浓度2µmol/L细胞形态更加不规则，出现少量凋亡小体；3µmol/L实验组出现大量凋亡小体及细胞碎片；2.台盼蓝拒染法、MTT比色法检测左旋紫草素对白血病K562细胞的增殖抑制：不同浓度的左旋紫草素（1µmol/L、2µmol/L、3µmol/L）在12h、24h、48h均能抑制K562

8、细胞的增殖，且其抑制作用呈浓度及时间依赖性；3.流式细胞术检测左旋紫草对白血病K562细胞的凋亡影响：不同浓度左旋紫草素（1µmol/L、2µmol/L、3µmol/L）作用K562细胞24h后流式细胞仪分析K562细胞早期及晚期凋亡率实验组分别为（4.85±0.34）%（1µmol/L）