结节性甲状腺疾病dapk%2crarβ2基因甲基化和mrna表达及临床意义

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1、摘要目的探讨结节性甲状腺疾病患者外周血中死亡相关蛋白激酶(deathassociatedproteinkinase，DAPK)基因，维甲酸受体β2(retinoicacidreceptor,RARβ2)基因启动子区的CpG岛甲基化状态及mRNA表达并探讨其临床意义，为甲状腺结节、肿瘤寻找新的肿瘤标记物和抗结节治疗及靶向治疗提供依据。方法选择2007年9月～2011年12确诊的结节性甲状腺疾病患者（结节性甲状腺肿41例，甲状腺腺瘤32例，，graves病合并结节34例，桥本合并结节40例，甲状腺癌23例）共170例和正常对照组30例，采空腹静脉血，

2、应用甲基化特异性PCR方法（Methylation-specificPCR，MSP）检测DAPK，RARβ2基因甲基化状态；应用逆转录聚合酶链反应(ReversedtranscriptivepolymerasechainreactionRT-PCR)方法检测外周血DAPK，RARβ22基因的mRNA表达情况。采用SPSS13.0统计软件，用χ检验评估组间甲基化状态及其mRNA表达，以P<0.05为差异，有统计学意义。分析外周血DAPK，RARβ2基因甲基化与其基因表达之间关系。结果（1）在甲状腺癌中DAPK，RARβ2基因呈高甲基化率（分别为39

3、.1%，43.5%），与正常对照组比较(P=0.000,0.000，P＜0.05)具显著性差异；（2）在甲状腺腺瘤组中DAPK呈高甲基化率（21.8%），与正常对照组比较（P＝0.033,P＜0.05），有统计学意义；在桥本甲状腺炎组RARβ2基因呈高甲基化率（35%），与正常对照组比较（P=0.001,P＜0.05），具显著性差异；（3）在有钙化点或淋巴结肿大的甲状腺癌中，DAPK，RARβ2基因呈高甲基化率（fisher值＝0.040，0.018；0.029，0.019，P＜0.05）,具统计学意义，在甲状腺癌组DAPK，RARβ2基因的甲基

4、化与患者的年龄，性别，结节大小比较fisher值＞0.05，无统计学意义。（4）DAPK基因在甲状腺癌，甲状腺腺瘤中mRNA表达减低或表达缺失,与正常对照组比较(P＝0.000，0.003，P＜0.05）,有显著性差异；RARβ2基因在甲状腺癌，桥本甲状腺炎合并结节中mRNA表达减低或表达缺失，与正常对照组比较(P＝0.000，0.002，P＜0.05）有显著性差异。（5）DAPK，RARβ2基因的表达减低或缺失与基因启动子区异常甲基化有关；基因甲基化与mRNA表达呈负相关。结论（1）DAPK，RARβ2基因在甲状腺癌外周血中呈高甲基化率，而其m

5、RNA表达减低或表达缺失；DAPK基因在甲状腺腺瘤中呈高甲基化率,甲基化率低于甲状腺癌组，mRNA表达减低；RARβ2基因在桥本甲状腺炎外周血中呈高甲基化率，mRNA表达减低。（2）甲状腺癌中DAPK，RARβ2基因甲基化与性别，年龄，结节大小无显著差异，与结节钙化及颈部淋巴结肿大有关。(3)联合检测DAPK、RARβ2基因甲基化状态能明显提高甲状腺癌的诊断敏感度，有可能成为甲状腺癌早期诊断的有效指标。(4)DAPK，RARβ2基因的表达缺失与基因启动子区异常甲基化有关。关键词：DAPK；RARβ2；结节性甲状腺疾病；甲基化；mRNA表达；外周血

6、TheMethylationandmRNAExpressionandClinicalSignificanceOfDAPK,RARβ2GeneinThyroidNodularDiseaseAbstractObjectiveTostudythegeneofdeathassociatedproteinkinase,DAPKinNodularthyroiddiseaseinpatientsperipheralblood,theCpGislandstateofgenepromotermethylationofretinoicacidreceptor,RAR

7、β2andmRNAexpressionandthendiscussitsclinicalsignificance:thethesisaimstolookfornewtumormarkersandthenprovidesthebasisforresistancetonodulestreatmentandtargetedtherapyforthyroidnoduleandtumor.MethodsWecollected170casesofclinicalpatientfromFirstAffiliatedHospitalofBaotoumedical

8、collegebetween2007.9-2011.12(including41casesofnodulargoiter,32cases