独特芋螺毒素cr5a的分离与结构鉴定研究

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1、以科学发展观促进祷技剖新(一)951Reuhin。ffBE，PeraMF，FongCY，eta1．Embryonicsteincellslinesfromhumanblastocysts·somaticdifferentiati。ninvitro。NatureBiotedl。2000，18：399～40412RossSA，McCafieryPJ，DragerUC，eta1．RetinoidsinembryonaldevelopmentPhysi[oRev，2000，80(3)：1021～105413W。busAM，KaomeiG，ShanJ，eta1．

2、Retinoicacidacceleratesembryoniestemcell—derivedcardiacdifferentiationandenhancesdevelopmentofventricularcardiomyocytes．JMolCellCardiol，1997，29(6)：1525～153914ZerhouniElias．SterncellsPrograms．Science．2003．300(9)：911～912作者简介况玲，博士、新疆农业大学动物医学学院兽医临床部副教授，全国中兽医学会理事，西北地区中兽医学会常务理事。电话：099

3、1—8762701(O)，0991～8763541(H)；传真：0991—8789218；E～mail：kuanglin990@sohu．tom。独特芋螺毒素Cr5a的分离与结构鉴定研究①刘尚义范崇旭曹瑛赵听友代先东钟明鼐陈冀胜北京1044信箱402号，中国人民解放军防化研究院，102205摘要芋螺是生活在热带海洋的食肉软体动物，其毒液中含有大量具有神经药理活性的活性肽。本研究首次从我国南海的独特芋螺的毒渡中分离出一种芋螺毒素CrSa．并进行了结构鉴定。结果表明，CrSa的氨基酸序列为：CCKFQFLNFCCNE。对Cr5a两种可能的二硫键配对方式异构

4、体进行了合成，HPLC分析表明其：硫键配对方式为Cysl·Cys”，Cys2一CysI、。Cr5a具有T一超家族芋螺毒素所特有的Cys骨架(CC—CC)，是T一超蓉族芋螺毒素中的新成员。关键词天然产物有机化学芋螺毒隶T一超家旅独特芋螺芋螺是热带海洋软体有毒动物，属于腹足纲新腹足目毒舌总科芋螺科。全世界约有500余种芋螺，主要分布在太平洋和印度洋热带海域。芋螺是食肉性动物，根据食性可分为食鱼芋螺、食螺芋螵和食虫芋螺三大粪，它们主要依靠强有力的毒液装置捕食和防御。每种芋螺的毒液中大约含有50～200种活性多肽(又称芋螺毒索)，不同种芋螺所含的毒索也各不相同

5、，因此芋螺毒液可以说是一个庞大的天然活性多肽宝库。1978年，Cruz等从地纹芋螺(Conasgeographus)毒液中分离纯化出第一种芋螺毒素。至今已有百余种芋螺毒素被分离鉴定，它们一般由10～35个氨基酸残基组成，多数含有形成链内二硫键的Cys残基。芋螺毒素主要作用于细胞膜上的各种离子通道和神经递质及激肽的受体，具有高度选择性和亲和力，可以作为离子通道和膜受体研究的工具，同时可能被直接开发成药物或作为新药先导化合物。因此芋螺毒索的生物化学、分子生物学和药理学等研究受到了广泛关注。多数已被研究鉴定的芋螺毒素舍有两对以上的二硫键。根据Cys残基骨架和

6、作用靶位．主耍将芋①国家自然科学基金资助项目(No2027208396以科学发展观促进科技创新‘上)螺毒素分为七大类：o——超家旅，包括8——芋螺毒素、pD～芋螺毒素、w——芋螺毒素和m——芋螺毒素；M——超家族，包括p——芋螺毒素、十——芋螺毒素和xM——芋螺毒素；A——超家族，包括。——芋螺毒素、nA——芋螺毒素和xA——芋螺毒素；s——超家族，包括d——芋螺毒素；T——超家族，包括Y——陀螺毒素等；P——超家族以及I一超家族。我们首次从采自我国南海的一种食虫芋螺一独特芋螺(Conuscaracteristicus)的毒液中分离得到一种新的芋螺毒素

7、，对其进行了结构鉴定和化学合成。结果表明，这是一种新的T超家族芋螺毒素。一、实验部分(一)试剂和仪器乙腈(色谱纯，北京昌化精细化工厂)；三氟乙酸(色谱纯，Sigma公司，美国)；芴甲氧羰基(Fmoc)保护L型氨基酸均为美国AdvancedChemTech公司产品；凝胶(SephadexG25SF，Pharmacia)；实验用水均为重蒸去离子水；其余试剂均为分析纯试剂。美国Agilent公司1100型高效液相色谱仪；美国Millipore公司Milli—Q型超纯水装置；德国Bruk—er公司BIFLEXIII型MALl)l—TOF质谱仪；美国PE公司AB

8、l491型蛋白测序仪；美国Beckman公司121MC型氨基酸自动分析仪；美国Vydac公司C