黄海葵毒素的分离纯化与鉴定【毕业论文】

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1、本科毕业论文（20届）黄海葵毒素的分离纯化与鉴定专业：生物科学目录摘要IAbstractII引言11材料与方法31.1材料31.1.1实验材料31.1.2实验仪器31.1.3实验试剂31.2方法31.2.1海葵粗毒的提取31.2.2海葵毒素的分离41.2.3毒素多肽的用Tris-TricineSDS-PAGE电泳71.2.4通过质谱分析对毒素多肽进行初步的鉴定92实验结果102.1海葵毒素经Sepax-100A色谱柱第一次分离102.2海葵毒素经C8半制备型反相HPLC第二次分离112.3海葵毒素经分析型C18反相柱第三次分离13

2、2.4对分离后的海葵毒素质谱分析14讨论16参考文献18致谢21摘要[摘要]：黄海葵（AnthopLeuraxanthogrammica）是舟山海域中常见的一种小型海葵，其身体以及触手中都含有刺细胞，刺细胞中含有海葵毒素[1]。海葵是作用于离子通道的缩氨酸毒素的丰富来源，两类缩氨酸毒素：一类是site-3钠通道毒素；另一类是Kv1钾通道毒素，其特性已被很好的表现，它们中的一部分被用于有价值的药理学试剂[2]。由于海葵种类繁多、分布较广，使得很多海葵毒素未得到研究，极大一部分的海葵毒素的结构与功能都尚不清楚。我们本实验通过反复冻融提

3、取海葵粗毒，并利用多维高效液相色谱对海葵毒素进行分离，同时在动物体上进行杀虫活性分析等方法，从黄海葵粗毒中筛选出七种具有较强杀虫活性的杀虫肽。这七种多肽在100μg/kg体重浓度下对水白虾以及黄粉虫幼虫都具有强且快速的麻痹及很强的致死活性，但其多肽在相同体重浓度下的相对于小白鼠而言毒性作用很弱。通过质谱分析，得到的七种杀虫多肽的分子量约在2~5kDa之间，其中分子量为5018kDa的杀虫多肽质谱得到的氨基酸序列为GGVPCLCDSDGPSVRGNTLSGIIWLRGCPSGWHNCKAHGPTIGWCCKQ。上述研究结果表明舟山黄

4、海葵可在生物农药方面进行深入研究，是一个研究和开发杀虫肽的宝库，同时也为从舟山黄海葵毒素中进一步筛选杀虫肽并深入研究其杀虫机理奠定了基础。[关键词]：黄海葵；海葵毒素；杀虫肽；高效液相色谱；质谱分析；Abstract[Abstract]:AnthopLeuraxanthogrammicaisacommonlysmallseaanemonesinzhoushanwaters.itsbodyandtentaclescontainthestingingcell.itcontainstheseaanemonetoxins[1].These

5、aanemoneistheresourceofpeptidetoxinswhichworkinionchannel.twokindsofpeptidetoxins:onekindissite-3sodiumchanneltoxins;AnotherkindisKv1potassiumchanneltoxins,itscharacterhasbeenperfectlyperformed.Whichofthemcouldbeastovaluablepharmacologicalreagents[2].Becauseofthevarie

6、tiesofkindsandthewidedistributionofseaanemones,alotofseaanemonestoxinshavenotbeenresearched,itisalsonotclearthatgreatpartofthestructureandfunctionoftheanemonestoxin.Inthisexperiment,werepeatedthefreeze-thawextractionoftheseaanemonecoarsepoison,andusemulti-dimensionalH

7、PLCtoseparatetheseaanemonetoxins,whilescreeningseveninsecticidalpeptideswhichhavethestronginsecticidalactivityfromAnthopLeuraxanthogrammicathoughinsecticidalanalysismethodIntheanimalbody.Throughthemassspectrometry,wegotthemolecularweightoftheseveninsecticidalpeptideis

8、inabout2-5kDa,includingthe5018kDa,gotthesequenceofaminoacids:GGVPCLCDSDGPSVRGNTLSGIIWLRGCPSGWHNCKAHGPTIGWCCKQ.Theresultsofth