型巩膜col1α1启动子cpg岛甲基化的实验研究

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1、fl：}：?气交：，譬萨答辩委员会主席：答辩委员会成员：论文答辩日期：温州医学院硕士学位论文目录IIJIlIIfJr1][1llllI[1＼1745428中文摘要．．．．．．．⋯．⋯．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯．⋯2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4前言⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．⋯6第一部分C57BL／6小鼠近视动物模型的建立材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9结j畏．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯⋯⋯

2、⋯．．．．．．．．．．．⋯．．．．．12分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16第二部分C57BL／6小鼠近视动物模型巩膜COLlalmRNA水平的变化材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19结果．．．．⋯．．．．．．．．．⋯⋯⋯．⋯．．．．．．．⋯⋯⋯．．．．．．．。．．．．．．．．．23分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25第三部分C57BL／6小鼠近视动物模型巩膜COLlal基因启动子CpG岛甲基化状态材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27结果．．⋯．⋯．．⋯⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

3、一．．．．．．．．33分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41结事台⋯．．．．．．．．．．．．。．．．．．．．。．．⋯⋯⋯⋯．⋯．．．．⋯．．．．．．．．⋯．44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45F待录．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．49致谢．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．．．⋯．．⋯⋯．．．⋯⋯．50综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51英文缩写及英中文对照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61温州

4、医学院硕士学位论文C57BL／6小鼠近视动物模型巩膜COLIatl启动子CpG岛甲基化的实验研究中文摘要目的1探讨C57BL／6小鼠形觉剥夺性近视动物模型的建立方法，揭示小鼠实验性近视形成的敏感期；2明确C57BL／6小鼠实验性近视动物模型巩膜COLlal基因mRNA水平的变化；3研究C57BL／6小鼠实验性近视动物模型巩膜COLlal启动子区域CpG岛甲基化水平的变化。方法1建立C57BL／6小鼠形觉剥夺性近视动物模型：23日龄C57BL／6小鼠74只，随机分为3组，单眼形觉剥夺组：分别剥夺2周(n=12)、3周(n=20)和4周(n=18)，对侧眼作为自身对照；形觉剥夺恢复组

5、(n=lo)：单眼形觉剥夺4周，分别恢复4天和7天；正常对照组(n=14)。实验前后分别用红外偏心摄影验光仪测量小鼠眼球的屈光状态，修正过的人眼角膜曲率计测量角膜曲率半径，步进电机式光学相干断层扫描仪测量眼球生物学参数，包括眼前节、玻璃体腔深度和眼轴长度等。2C57BL／6小鼠实验性近视巩膜COLlQtlmRNA水平的变化：取单眼形觉剥夺4周、单眼遮盖4周，恢复7天以及年龄相匹配的正常对照组C57BL／6小鼠各lO只。分离巩膜组织，实验眼、对侧眼、对照眼按随机数字表，分别每两只巩膜合并提取总RNA，逆转录为cDNA，realtimePCR检测每组巩膜中COLlQtl的表达。3C5

6、7BL／6小鼠实验性近视巩膜COLlal启动子区域CpG岛甲基化水平的变化：取单眼形觉剥夺4周、单眼遮盖4周，恢复7天以及年龄相匹配的正常对照组C57BL／6小鼠各10只。实验眼、对侧眼、对照眼按随机数字表，分别每两只巩膜合并提取基因组DNA，亚硫酸盐修饰后用克隆测序的方法检测不同处理眼巩膜组织COLlctl启动子区域CpG岛甲基化状况。统计学处理采用SPSSll．5统计学软件，组内实验眼对侧眼比较采用配对t检验，不同组间比较采用独立样本t检验。2温州医学院硕士学位论文结果l形觉剥夺2周，实验眼相比对侧眼向近视方向漂移(-o．85+1．65)D(P>O．05)，眼球各生物学参数未

7、见明显改变：形觉剥夺3周，实验组相比对照组向近视方向漂移(．4．27-4-1．60)D(P>O．05)，伴有玻璃体腔深度增加(10-a：7)tun(P>0．05)和眼轴延长(6士8)岬(尸>0．05)；形觉剥夺4周组，实验眼相比对侧眼向近视方向漂移(．5．22士1．28)D(尸<0．05)并伴玻璃体腔深度增加(27+13)岬(尸<0．05)和眼轴延长(284-12)tun(P<0．05)；去除眼罩4天实验性近视迅速向远视方向漂移，直到去除眼罩7天，实验性近视完全恢复。2经过4周形