C57BL／6小鼠形觉剥夺性近视巩膜COLlσ2启动子区域CpG岛甲基化水平-论文.pdf

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1、324·中华眼视光学与视觉科学杂志2014年6月第l6卷第6期ChinJOptomOphthalmolVisSci，June2014，Vo1．16，No．6·论著·近视研究·C57BL／6小鼠形觉剥夺性近视巩膜COLlc~2启动子区域CpG岛甲基化水平矫诗明郑帆应黄芳黄芙蓉赵福新瞿佳周翔天【摘要】目的研究C57BL／6小鼠形觉剥夺性近视形成和恢复期巩膜COLla2mRNA表达及其启动子区域CpG岛甲基化水平。方法实验研究。单眼形觉剥夺建立C57BL／6小鼠近视动物模型和恢复期动物模型，分别单眼遮盖4周(48只)和单眼遮盖4周恢复1周(24只)，另

2、外设立正常对照组小鼠36只。实验前后分别用红外偏心摄影验光仪测量小鼠眼球的屈光状态，OCT检测小鼠眼轴长度和玻璃体腔深度。RT—PCR检测巩膜COLlc~2mRNA表达水平；硫化测序聚合酶链式反应(BSP)检测C57BL／6小鼠巩膜COLlc~2启动子区域CpG岛甲基化水平。同一小鼠的实验眼和对侧眼比较采用配对t检验，不同组间比较采用独立样本t检验。结果形觉剥夺4周，实验眼相比对侧眼形成明显的相对近视(拄一2．64，P<0．05)，并伴有眼轴和玻璃体腔延长。形觉剥夺4周恢复1周后，相对近视和延长的眼轴和玻璃体腔长度都获得恢复。形觉剥夺4周后，实验

3、眼和正常对照眼相比COLla2mRNA表达明显下降(t=3．05．P<0．05)，形觉剥夺4周恢复1周实验眼与正常对照眼相比差异无统计学意义。形觉剥夺4周，实验眼和对侧眼及正常对照眼COLlc~2启动子区域CpG岛甲基化水平差异均无统计学意义。结论小鼠单眼形觉剥夺4周可诱导出相对近视，巩膜内COLlc~2mRNA表达明显下降，但该改变与其基因启动子区CpG岛的甲基化状态无关【关键词】近视；COLlc~2；启动子；DNA甲基化；模型，动物StudyofCpGmethylationoftheCOLloL2promoterinform-deprivat

4、ionmyopiainC57BL／6miceJ／aoShiming，ZhengFan，YingHuangfang，HuangFurong，ZhaoFuxing，Qun，ZhouXiangtian．EyeHospitalofWenzhouMedicalUniversity，Wenzhou325027，ChinaCorrespondingauthor：ZhouXiangtian，Email：zxt—dr@wz．．cn【Abstract】ObjectiveToinvestigatethechangesinrefractionandocularbiome

5、tricparametersinform—deprivationmyopia；totrytofindthechangesinmRNAandmethylationinthepromoteroftheCOLla2geneduringtheformdeprivationandrecoveryperiods．MethodsThiswasanexperimentalstudytoestablishtheC57BL／6mouseanimalmodelforform—deprivationmyopiaandrecovery．Miceintheform—depr

6、ivationgroupworeadiffuseronarandomlychoseneyefor4weeks(n=48)andanothergroupunderwent4weeksofmonoculardiffusertreatmentfollowedby7daysofrecovery(n=24)．Anadditional36micewithoutanytreatmentwerethenonnalcontrolgroup．Refractionwasmeasuredbyphotoretinoscopy．Vitreouschamberdepth(VC

7、D)andaxiallength(AL)weremeasuredbyopticalcoherencetomography(OCT)withfocalplaneadvancement．TheCOLla2mRNAlevelintheselerawasdeterminedbyreal—timePCRandtheCOLlct2methylationstatewasobservedbybisulfiteDNAsequencing．Datawereanalyzedusingttest．ResultsAfter4weeksofformdeprivation，a

8、significantmyopicshifthadbeeninducedinthetreatedeyescomparedwiththef