蛋白样品制备全攻略

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1、蛋白样品制备全攻略双向电泳可不是一件容易的差事，花银子花时间不说，结果还很难重复。想要搞定双向电泳，关键在于建立一套有效、可重复的样品制备方法。方法是多种多样的，不过都基本遵循以下的原则：1.样品缓冲液中离子浓度的控制视，占了总蛋白的约10-20%。这两种蛋白异军突起，常常掩盖了其它类似大小的蛋白，使2.溶解包括疏水蛋白在内的所有蛋白质我们无视低丰度蛋白的存在，也降低了双向电3.防止聚焦过程中已溶解蛋白质的聚焦和泳的分辨率。因此，在分析目的蛋白之前，我析出们一定要先干掉白蛋白和IgG这两个家伙。4.防止样品制备过程中及其后蛋白样品的

2、样品中的核酸会对等电聚焦的结果产生干酶或化学降解等的修饰反应扰：DNA复合物在变性条件下发生解离而使溶5.去除或完全降解核酸及其他干扰分子液的粘稠度增加，可阻碍蛋白质进入IPG胶条，并减慢蛋白质在胶条中的移动速度。DNA也会6.去除高丰度或不相关的蛋白质，提高低与样品中的某些蛋白质结合，出现人工假象和丰度蛋白的浓度，使其达到检测要求条纹。提高分辨率和确保重复性是双向电泳实验具体的解决方案如下：最重要的两个目标。蛋白样品制备在实现这两个目标的过程中起到了核心作用。Bio-Rad公去除盐分、去垢剂、脂类、酚类司的ReadyPrep试剂盒

3、通过试剂增溶或差异ReadyPrep2-D净化试剂盒溶解来减少脱尾或降低样品复杂性，从而成为ReadyPrep2-D净化试剂盒可去除蛋白用户可靠的实验工具。ReadyPrep产品线包含样品中的去垢剂、盐分、小肽、脂类和酚类化一系列2-D样品制备试剂盒，不仅适用于通用合物。这些物质会干扰双向电泳。本试剂盒含样品（总蛋白）处理，而且可以将复杂样品按有不受去垢剂、离液剂或其它实验中常用试剂特定方法分级。处理通用样品的试剂盒包括总干扰的沉淀试剂，可充分沉淀样品蛋白，并保蛋白抽提和蛋白净化（clean-up）。样品分级试证了蛋白样品的回收效率

4、和浓度。剂盒可用来降低样品复杂程度，同时有助于低丰度蛋白的富集和鉴定。这类试剂盒又分为两去除白蛋白种，一种是基于蛋白不同的亚细胞定位来分离，AurumAffi–Gel蓝胶小型试剂盒和层析另一种是对细胞总蛋白进行分级，从而适合于柱总蛋白质组分析。通过亲和层析，Affi–Gel蓝胶能去除血清从血清或血浆中提取的低丰度蛋白经常会和血浆中90%的白蛋白。受到白蛋白和IgG的干扰。白蛋白在血清总蛋去除白蛋白/IgG白中的含量约为60-70%，IgG虽小，也不可轻www.ebiotrade.com第1页，共21页下一页返回Aurum血清蛋白Mi

5、ni试剂盒的可能干扰IEF的物质。Aurum血清蛋白Mini试剂盒包含了MicroReadyPrep蛋白抽提试剂盒(膜II)Bio-Spin层析柱，其中填充了Affi-Gel蓝胶和膜II试剂盒做为其它膜蛋白分离试剂盒的Affi-GelProteinA填料。这两种树脂混合物能补充，是专门为有效分离较为复杂的膜蛋白而同时选择性地结合白蛋白和IgG，处理过的样优化的。抽提的过程用到了碳酸钠和超速离心品无需额外纯化，就能立即用于2D的分析。机。试剂盒中的2-D水化/上样缓冲液含有强离一次纯化就能搞定两个东西，操作步骤减少了，液性的兼性去垢剂

6、ASB-14。效率也提高了。ReadyPrep蛋白抽提试剂盒(信号)去除DNA绝大多数细胞的胞浆膜都有富含神经鞘磷最简单的方法就是酶解。当样品用高pH脂和胆固醇的微区域（酯筏）。与这些脂筏相联溶液裂解后，在溶液中加入核酸内切酶，既能系的蛋白往往是参与物质跨膜转运或信号转导有效降解核酸，又能使内源性蛋白酶的活性最的蛋白质。这类蛋白包括GPI锚订蛋白、低。也可以在冰浴环境中，通过超声处理的方caveolin、caveolae(caveolin-associated法将大片段的核酸打断成小片段后，直接进行proteins)、酰化酪氨酸激酶

7、、G蛋白异三聚体，双向电泳。以及一些含跨膜结构域的蛋白(Simonsand总蛋白抽提Ikonen1997,BrownandRose1992,PartonandSimons1995,Andersonetal.1992)。与ReadyPrep蛋白抽提试剂盒(总蛋白)胞膜当中这些富含酯类的微区域相结合的蛋白ReadyPrep蛋白抽提试剂盒(总蛋白)质在4°CTritonX-100的溶液中难溶。是一种操作简单、快捷、重复性好的试剂盒，ReadyPrep蛋白抽提试剂盒(信号)利用这一用来抽提适合于双向电泳的细胞全蛋白。试剂原理将信号蛋白有选择

8、性地加以回收。盒中离液性超强的抽提溶液含有兼性去垢剂ReadyPrep蛋白抽提试剂盒(胞浆/核)ASB-14，从而使该溶液能溶解各种细胞的全蛋白。ReadyPrep蛋白抽提试剂盒(胞浆/核)使用一种专门配制的缓冲液和差速离心将细胞核完