rna干扰技术研究五氯酚pcp对mcf-7细胞类固醇激素相关基因表达的影响

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1、独创性声明学位论文题目：RNA干扰技术研究五氯酚PCP对MCF-7细胞类固醇激素相关基因表达的影响本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了标注。学位论文作者：奔瓢蹊席签字日期：卅妒年多月石日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生部可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影

2、印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密，口保密期限至年月止)。学术论文作者签名：勃确蕊争导师签名：叫亚签字日期：功矽年易月占日签字日期：冲年6月多日目录缩写与符号⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．I摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．IAbstracts⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．III第1章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1五氯酚的污染现状⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l1．2五氯酚对生物体

3、的毒性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．3五氯酚干扰内分泌系统的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31．3．1受体介导反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41．3．2非受体介导反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．3．3影响内分泌系统、神经系统与免疫系统的综合效应⋯⋯⋯⋯51．4RNA干扰技术的简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．61．4．1RNAi的作用机制与特点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．61．4．2RNAi的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．5类固醇合成酶关键基因的功能研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．81

4、．5．1CYPl7⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．5．2CYPl9⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．5．3StAR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．91．5．417B—HSD⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10第2章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．1选题的背景及意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1l2．2研究目的和主要研究内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．112．2．1研究目的⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．112．2．2研究内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1

5、22．3创新之处⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．4技术路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．13第3章五氯酚对MCF一7和U2-OS细胞中类固醇激素合成酶关键基因的影响⋯153．1引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．153．2实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．153．3实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．163．3．1细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．163．3．2细胞冻存⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．163．3．3MTT法检测MCF-7和U2一OS细胞的

6、抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯．．173．3．4细胞总RNA的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯173．3．5cDNA样品的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．193．3．6荧光定量RCR的引物的设计合成与检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯203．3．7Real-timePCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯213．3．8数据统计分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．223．4实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．223．4．1MTT法检测MCF-7和U2—0S细胞抑制的结果⋯⋯⋯⋯⋯．．223．4．2细胞总RNA提取结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯．233．4．3PCP对MCF-7细胞中类固醇激素合成酶关键基因表达的影响⋯243．4．4PCP对U2—0S细胞中类固醇激素合成酶关键基因表达的影响⋯253．5讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．263．6结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28第4章PCP对脚口基因干扰后的MCF-7细胞中类固醇激素合成酶关键基因的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．．294．1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．294．2实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．294．3实验方

8、法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．304．3．1ER盯RNA干扰质粒载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．304．3．2G418筛选稳定表达的MCF一7细胞系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯314．3．3质粒的转染⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l4．3．4Real—timePCR检测ER口mRNA的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯324．3．5western印迹法检测RNAi后ERQ蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯334．3．6Real—timePCR检测