RNA干扰基因敲低雌激素受体β对人成骨样细胞生长的影响

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1、万方数据武些蛊笠曼盟垒王塑基因筮低监邀塞量佳皂盟厶盛置搓细胞生基鲤显喧筮!翅RNA干扰基因敲低雌激素受体p对人成骨样细胞生长的影响武兆忠刘敏1冯鉴强2林伟王金玉李园(广州医学院第二附属医院核医学科医学影像实验室，广东广州510260)【摘要)目的观察经特异性小干扰RNA(smallinterfereRNA，siRNA)下调人成骨样细胞株MG63的雌激素受体8(ERl3)后对其生长状况的影响。方法利异j计算机辅助设计并合成ERl3siRNA前体基因后，定向克隆入pSilencer4．1-CMV质粒中，构建重组的ERBsiRNA表达载体并测序鉴定

2、。由脂质体介导重组质粒稳定转染人人成骨样细胞株MG-63，潮霉素筛选阳性抗性克隆细胞。RT．PCR法检测ERB基因在人成骨样细胞株MG-63的表达，抗生物素蛋白一生物素-过氧化物酶复合体法(ABC)分析ERB蛋白在人成骨样细胞株MG-63内的表达与定位。Mrnl法测ERl3基因被特异性下调后对MG-63细胞生长的影响。流式细胞术分析ERl3siRNA对人成骨样细胞株MG-63细胞生长周期的影响。采用改良Gomori氏钙钴法分析ERl3siRNA对人成骨样细胞株MG-63表达碱性磷酸酶的影响。结果构建表达ERl3siRNA的重组真核表达载体，并

3、成功地下调了人成骨样细胞株MG-63的ERl3基因，而ERl3siRNA下调人成骨样细胞株MG-63的ER[3对细胞的生长特性无明显影响。结论成功地构建了ERl3下调的人成骨样细胞模型，该模型为进一步研究雌激素及其受体对骨代谢影响的分子机制提供了基础材料。(关键词)RNA干扰；雌激素受体B；入成骨样细胞；细胞模型(中图分类号]Q罗[文献标识码]A[文章编号】1005-9202(2008)08-0729-05Effectofestrogenreceptor[3knockeddownbyRNAinterferenceonhumanusteobla

4、st-likecellWUZhao-Zhong，LIUMin，FENGJian—Qiang，eta／．DepartmentofNuclearMedicine，GuangzhouMedicalCollegeAffiliatedSecondHospital，Guangzhou510260，Guangdong，China【Abstract】ObjectiveToobservethegrowthofhumanosteoblast—likecellafterestrogenreceptor13subunitgeneknockeddownbyRNAint

5、erference．MethodsAccordingtothecomputeraideddesign(CAD)，ERl3specificsmallinterferenceRNA(siRNA)genewagsynthesizedandclonedintotheexpressionvectorpSilencer4．1．CMV．TherecombinantERBsiRNAplasmidWaStransfectedintohumanoste．oblast．1ikecelllineMG-63bvlipofectin，theclonedMG-63cell

6、swefeselectedbyhygromycin，andtheclonedMG-63cellwagculturedmorethan20passagesaftertransfeetion．7nleexpressionofERl3mRNAinMG-63cellswasdetectedbyRT．PCmTheexpressionandlocationofERl3proteinwereidentifiedbyimmunocytochemistry．Theproliferationrate，growthcycleofMG-63cellandalkali

7、nephosphataseexpressionwereobservedbyM'IT．flowcytometryandmodifiedGomorimethod．ResultsTherecombinanteukaryoteplasmidvectorwasconstructed．Furthermore，therecombinantplasmidknockeddownERl3proteininhumanosteoblast．1ikecells．ErBsiRNAdownregulatingMG-63Erl3subgenehadnoobviouseffe

8、ctOHcellulargrowth．ConclusionsHarianosteoblast．1ikeeellmodelknockeddownERl3genebyR