老龄大鼠心脏缺血预处理后热休克蛋白27的变化研究

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1、·1308··论著·老龄大鼠心脏缺血预处理后热休克蛋白27的变化研究路艳，陈莹，李宗斌，赵玉生【摘要】目的观察热休克蚤白(HSP)27在青年大鼠及老年大鼠心肌缺血预处理时的mRNA和蛋白表达量及变化规律。方法大鼠在体心脏经缺血5min、再灌注5min(反复3次)预处理后，于0、5、l5、45、60min取左心室缺血的前壁与非缺血的后壁肌组织分别匀浆，采用RT—PCR方法观察缺血预处理对青年及老龄大鼠HSP27mRNA在不同时间点表达的改变情况，离心取上清液及沉淀蛋白分别用WesternBlot检测HSP27在预处理不同时刻可溶性蛋白及不溶性蛋白含量的改变。新鲜冷冻心肌组织采用免疫荧光方法标记

2、HSP27，在激光共聚焦显微镜下观察青年大鼠及老年大鼠在缺血预处理后HSP27在不同时间点的分布情况。结果(1)经缺血预处理后约15min，老年大鼠及青年大鼠HSP27mRNA的表达即有所增加。(2)青年大鼠心脏缺血预处理后即刻前壁缺血组织HSP27从胞质(上清液)移至不溶性成分细胞骨架(沉淀)，至15min时大部分移到沉淀中，在45min时HSP27则几乎全部复位到上清液中。(3)免疫组织学检查显示青年大鼠HSP27在IPC后15min向z线及润盘部位聚集；老年大鼠中HSP27移位程度与青年大鼠相比明显减弱。结论老年大鼠心肌组织中小分子HSP丧失移位能力，可能是老年大鼠缺血预处理保护作用减

3、弱的重要原因之一。【关键词】老年；大鼠；缺血预处理，心肌；热休克蛋白质类【中图分类号】R364．12【文献标识码】A【文章编号】1007—9572(2011)04—1308—03ExpressionofHeatShockProtein27inRatMyocardimnDamagedbyIschemia—ReperfusionLUYah，CHEN，zon1g—bin，eta1．InstituteofGeriatricCardiology．ChinesePLAGeneralHospita1．Beijing100853，China【Abstract】ObjectivePreviousstudies

4、haveshowuthatthesmallheatshockproteins(sHSPs)protectthemyoeardi-amfromischemia—preconditioning(L／P)一induceddamage．Thepresentstudyisdesignedtoinvestigatewhethertheexpres—sionofHSP27intheI／R—induceddamagedmyocardiumisdifferentinagingandyoungrats．MethodsSixty—fourSDratswerepreparedtoestablishI／Pmodels

5、andrandomlydividedintogroupsI(n=4，youngcontro1)，II(n=20，youngmode1)，Ill(n=4，agingcontro1)，IV(n=20，agingmode1)．HearttissueswerecollectedatdifferenttimeafterI／P—induceddamageforfurtheruse．RT—PCRandWesternblotanalysiswereperformedtodeterminetheexpressionofHSP27mRNAandprotein．Doub—leimmunofluorescencel

6、abeling—confoealmicroscopywasusedtoobservethetranslocationofHSP27afterI／PResults(1)RT—PCRshowedthattheexpressionofHSP27mRNAandproteindidnotchangeinagingoradultrats，buttheexpressionofHSP27mRNAincreasedafterabout15rainischemiatreatment．(2)WesternblotdemonstratedHSP27proteininanteriorwallofleftventric

7、letransferredfromtheeytosoltositesofthemyofibrillarsystemimmediatelyafterI／Pinaduhratsascomparedwithagedrats，HSP27wasfoundinthemyofibrillarsysteafterabout15minischemiatreatment，andnearlyallHSP27transferedto