大鼠脑缺血预处理再缺血损伤后脑红蛋白的表达变化

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1、一军医进修学院硕士学位论文英文缩写APSB口bpBSACGBDABddH20扭峒mELISAHGBHRPIODMCAomMMGBNGBoDoPDPCDPBS刚DRoSRNSRPMRT．PCRTTC英文缩略词表英文全名AmmoniumpersulfateBrainischemicprecondictioningBasePairBovineserumalbuminCytoglobinDiarninobenzidineDoubledestilledwaterDeoxribonucleosidetriphosphateEnzymelinkedimmunoso

2、rbentassayHaemoglobinHorseradishPeroxidaseIntegratedopticaldensityMiddlecerebralarteryocclusionMillimolePerliterMyoglobinNeuroglobinOpticaldensityO-PheaylenediamineProgrammedcelldeathPhosPhate-buffersalineReversibleischemicneurologicdeficitReactiveoxygenspeciesReactivenitrogens

3、peciesRevolutionsPerMinuteReversetranscripfion-PCR2,3,5-Triphenyltetrazoliumchloride中文全名过硫酸铵脑缺血预处理碱基对牛血清白蛋白胞红蛋白二氨基联苯胺双蒸水脱氧核糖核苷三磷酸酶联免疫吸附测定血红蛋白辣根过氧化物酶累积光密度大脑中动脉阻塞毫摩尔浓度肌红蛋白脑红蛋白光密度邻苯二胺程序性细胞死亡磷酸盐缓冲液可逆性缺血性神经功能缺损活性氧族活性氮族每分钟转速反转录多聚酶链式反应氯三苯四唑军医进修学院硕上学位论文题目：大鼠脑缺血预处理再缺血损伤后脑红蛋白的表达变化中文摘要脑缺血

4、预处理(brainischcmicprecondietioning,BIP)是指预先给动物轻微、短时而不至于引起神经元死亡的脑缺血刺激，诱导产生内源性保护机制，可提高脑组织对后续损伤性缺血的耐受能力．BIP脑保护作用可能与热休克蛋白、腺苷、兴奋性氨基酸，新的基因产物、抗凋亡基因等有关，但其确切机制尚不清楚．2000年脑红蛋白(Neuroglobin，NGB)被发现后，许多研究提示高表达NGB对脑缺血缺氧性损害有保护作用，这也为研究BIP的脑保护机制提供了新的思路．NGB的含量较低，但其氧合能力强，可减少氧化应激诱导的ROS／RNS过表达和脂质过氧化作

5、用，抑制线粒体功能障碍、凋亡及细胞死亡．虽然用BIP来预防或治疗脑缺血损伤在临床上很不现实，但通过分析BIP条件下NGB的表达及其可能的脑保护机制，可帮助寻找新的可以诱发类似于BIP效应并增加NGB合成的方法．因此，通过设计改良的局灶．局灶性脑缺血模型，探讨BIP条件下再缺血损伤后脑组织内NGB的表达，并初步检测血清中NGB的动态变化．为此，进行如下研究。1线栓法阻塞大脑中动脉(MCAO)制作局灶性BIP再缺血损伤动物模型时，在插栓点的选择、颈外动脉是否结扎等问题上有争议．本实验发现自颈总动脉置栓能便于线栓顺利插入，置入线栓后保持颈外动脉通畅，可减少

6、BIP期间颈内动脉血栓的形成，防止二次插栓困难，从而有效地控制预处理缺血时间。结果：MCAO脑缺血预处理10min，动物清醒后无明显偏瘫；24h后再缺血损伤2h，动物醒后活动差，均有对侧偏瘫表现，缺血侧脑组织大片坏死。可据此制作局灶性BIP．局灶再缺血损伤模型．2有研究显示沙鼠脑缺血20min再灌注72h内大脑皮层NGB阳性神2军医进修学院硕士学位论文经元数呈现先上升后下降的趋势，24h达最高峰。本实验显示SD大鼠BIP再缺血损伤后对侧脑皮层NGB阳性神经元数、NGB阳性物质在24h内逐渐升高，然后下降；其中阳性神经元数提前到16h即达高峰，而NGB

7、阳性物质及其累积光密度均在24h达高峰，即阳性细胞数高峰出现在前，然后合成阳性物质达高峰．BIP干预的缺血损伤后16h阳性细胞数即达高峰，较单纯缺血再灌注后24h阳性细胞数峰值提前，这可能是BIP干预的结果．‘各实验组48h内NGB的表达均较对照组增多，有显著意义．以上结果提示NGB可能参与BIP对缺血性脑损伤的保护作用．3对侧海马NGB阳性细胞数、下丘脑区域细胞数均较对照组增多，但峰值时间分别为再缺血损伤后8h和2h，均比皮层峰值提前，这可能是海马、下丘脑对缺血损伤应激更加敏感所致．BIP再缺血损伤2-48h内血清·弘NGB浓度是变化的，24h和4

8、8h均显著增多，48h比24h增多更明显．BIP对缺血损伤的保护作用或许能通过NGB血清学水平反映出来．3一