大鼠脑缺血再灌注后ncam基因表达的变化

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1、大鼠脑缺血再灌注后NCAM基因表达的变化　　［关键词］脑缺血;再灌注损伤;细胞黏附分子，神经元;基因表达;大鼠　　［ABSTRACT］ObjectiveToobservenervecelladhesionmolecule（NCAM）expressionafterreperfusionoffocalcerebralis-chemiainrats.MethodsThemodeloffocalischemicreperfusioninSDratsinalmiddlecerebralartery（MCA）occlusiononofilamentsuture.Insituhybri

2、dizationedtoexaminetheexpressionofNCAMmRNAat2，6，12hand1，2，3，7，14dafterreperfusion.ResultsInthecortex，NCAMmRNAexpression，theexpressionreachedthepeakafteroneday，theresteasinthecortex.ConclusionThesustainedincreaseofNCAMexpressionfolloightplayanimportantroleinneuralrecovery.　　［KEY）是免疫球蛋白超家族中

3、的一员，在神经元突触塑形，在脑、视神经、嗅神经组织中NCAM保持低水平表达。有证据表明，NCAM能促进控制学习功能脑组织的重塑并显著刺激神经细胞的生长［1］。NCAM参与神经元的黏附与神经生长，与突触结构的维持、模式重建及神经元出芽都有密切的关系。实验证实，NCAM能促进脑损伤后神经细胞的重塑。短暂性全脑缺血后，海马颗粒细胞的NCAM表达增加［2］，大脑中动脉缺血再灌注后，在纹状体的室下区也可见到NCAM表达增加［3］。本实验旨在探讨脑损伤后NCAM基因表达的变化规律及其在脑损伤后脑组织重新修复过程中的作用。　　1材料与方法　　1.1动物和分组成年健康雄性SpragueD

4、ain再灌注2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d、14d组和假手术组，每组4只。假手术组除不插线外，余步骤同实验组。　　1.2标本采集和组织切片制备各组大鼠在规定的时间点取材，假手术组于手术后1d取材。大鼠在100g/L水合氯醛麻醉下，经左心室插管给予40g/L多聚甲醛灌注固定后取脑，标本置入40g/L多聚甲醛后固定2h，蒸馏水浸泡4h。常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋，连续冠切片，厚度7μm，粘于多聚赖氨酸处理后的玻片上，温室保存，用于NCAMmRNA原位杂交及其对照实验。　　1.3原位杂交检测NCAMmRNA原位杂交试剂盒、DAB显色试剂盒均由武汉博士德

5、生物工程有限公司提供。严格按照试剂盒说明操作，DAB显色30min后水洗，封片。光镜下观察，细胞核或细胞浆出现棕黄色颗粒者为阳性细胞。　　1.4统计处理高倍镜下（400倍）每例标本在皮质区和纹状体区随机各取4个不重叠的视野计数阳性细胞，数据以x±s表示，组间比较采用t检验。　　2结果　　假手术组双侧半球和缺血组非缺血侧脑组织神经细胞NCAMmRNA均有微弱表达。缺血再灌注后缺血侧神经组织NCAMmRNA表达增强，主要位于皮质区及纹状体区，高倍镜下阳性信号位于细胞浆与细胞核内，呈棕黄色。皮质区:缺血再灌注后2h神经细胞出现NCAMmRNA的表达，随着再灌注时间延长，阳性细胞

6、数增多，于12h达高峰，14d后降至假手术组水平。纹状体区:缺血再灌注后2h神经细胞出现NCAMmRNA的表达，随着再灌注时间延长，阳性细胞数增多，着色加深并于1d达高峰，14d后降至假手术组水平。见表1。　　表1脑缺血再灌注后皮质及纹状体区NCAMmRNA阳性细胞数（略）与假手术组比较，*t=2.73～11.33，P<0.05　　3讨论　　NCAM是一个单链的跨膜糖蛋白，根据其糖基部分唾液酸的含量高低可分为两类，NCAM-H和NCAM-L［4］。胚胎发育早期和成年期，NCAM主要以NCAM-L的形式出现，主要分布在神经细胞、胶质细胞、肌肉、内分泌器官、生殖器官、泌

7、尿系统中，也有少数区域如嗅觉系统和齿状回内细胞及部分苔状纤维等以MCAM-H的形式出现［5］，这些区域是突触塑形长期存在的区域。NCAM的一个最显著特征是含有以α2～8键相连的多聚唾液酸糖链（PSA），PSA的存在与否会直接或间接调节细胞间的黏附能力。神经生长发育阶段及损伤修复阶段，在NCAM外围形成的带负电荷的PSA表达水平较高，随着发育成熟，PSA水平逐渐下降［6］。成年后仅在嗅神经、哺乳期的下丘脑等有突触形成或生理性塑形的区域内有PSA存在。在成年鼠脑中，内皮质和下丘脑失去联系后，脑齿状回外层PSA表达增加［7］。上述结