视网膜缺血再灌注损伤后凋亡相关基因表达的变化

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1、视网膜缺血再灌注损伤后凋亡相关基因表达的变化作者：袁春燕牛膺筠张瑞丁玉枝【关键词】视网膜;再灌注损伤;基因,WTp53;基因,bax;基因,bcl-2;大鼠,Wistar　　［摘要］目的研究视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）中凋亡相关基因野生型p53（WTp53）、bax和bcl-2表达的变化，探讨其作用机制。方法将28只Wistar大鼠随机分为正常组、缺血组，其中缺血组又分为再灌注后1、6、12、24、48和72h等6个组。建立RIRI动物模型，用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（SABC）法检测再灌注后不同时段视网膜组织中WTp

2、53、bax和bcl-2基因表达的变化。结果缺血组视网膜再灌注后WTp53、Bax蛋白表达增加，与正常组比较，再灌注6～72h差异有显著意义（F=487.19、281.97，q=11.526～52.401，P<0.05）。缺血组视网膜再灌注后Bcl-2蛋白表达无明显变化，与正常组比较，差异无显著性（P>0.05）。结论缺血再灌注损伤引起WTp53、bax基因在视网膜神经节细胞层、神经纤维层与内核层表达增高;WTp53和bax可能通过诱导或促进神经节细胞凋亡参与了视网膜缺血再灌注损伤的发生。　　［关键词］视网膜;再灌注损伤;基因，WTp

3、53;基因，bax;基因，bcl-2;大鼠，Wistar　　［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheexpressionof8WTp53，baxandbcl-2inretinaischemia/reperfusioninjuryandexplorethemechanism.MethodsTwenty-eightratswererandomlydividedintonormal（4rats）andischemiagroup，andthelatterwassubdividedinto1，6，12，24，48，and72h

4、afterreperfusion，respectively.Theratmodelofexperimentalretinaischemia/reperfusioninjurywasmadebyincreasingtheintraocularpressure.TheexpressionofWTp53，baxandbcl-2wasdeterminedbystreptavidin-biotincomplex（SABC）immunohistochemistry.ResultsInischemiagroup，WTp53expressionandbaxexp

5、ressionincreasedsignificantly（F=487.19，281.97;q=11.526-52.401;P<0.05），whilethebcl-2expressionhadlittlechange.Conclu-sionWTp53andbaxexpressionincreaseinRIRI.WTp53andbaxmayplayapartinRIRIbypromotingapoptosis.　　［KEYWORDS］retina;reperfusioninjury;genes，WTp53;genes，bax;genes，bc

6、l-2;rats，Wistar8　　视网膜缺血再灌注损伤是眼科常见的病理过程，严重影响病人视功能。其发生机制十分复杂，已成为近年眼科的研究热点之一。目前研究发现，视网膜缺血再灌注损伤中存在着神经细胞凋亡现象，且凋亡是视网膜神经细胞丢失的重要因素之一［1］。本实验通过建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，研究凋亡相关基因野生型p53（WTp53）、bax和bcl-2的表达变化，探讨视网膜缺血再灌注损伤的发生机制。现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1.1实验材料　　1.1.1动物及分组健康无眼疾的Wistar大鼠（青岛市实验动物与动物实验中心提供）2

7、8只，体质量250～300g，雌雄不拘，室温环境饲养。随机分为两组:正常组（4只）、缺血再灌注组（24只），其中缺血再灌注组又分为再灌注后1、6、12、24、48和72h等6个组，每组4只大鼠。　　1.1.2主要试剂兔抗大鼠WTp53、bax、bcl-2多抗（美国SantaCruz生物技术公司生产），链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（SABC）免疫组化试剂盒（武汉Boster生物工程公司）。　　1.2实验方法　　1.2.1动物模型的建立采用前房穿刺加压法建立大鼠缺血再灌注损伤模型，方法见文献［2］。　　1.2.2标本的取材、固定与切片分别于再

8、灌注后1、6、12、24、48、72h处死动物，摘除眼球，制作石蜡切片，方法见文献［2］。　　　　1.2.3免疫组织化学染色将标本的石蜡