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时间:2018-11-13
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1、大鼠脑缺血再灌注后NCAM基因表达的变化 [关键词]脑缺血;再灌注损伤;细胞黏附分子,神经元;基因表达;大鼠 [ABSTRACT]ObjectiveToobservenervecelladhesionmolecule(NCAM)expressionafterreperfusionoffocalcerebralis-chemiainrats.MethodsThemodeloffocalischemicreperfusioninSDratsinalmiddlecerebralartery(MCA)occlusiononofilamentsuture.Insituhybri
2、dizationedtoexaminetheexpressionofNCAMmRNAat2,6,12hand1,2,3,7,14dafterreperfusion.ResultsInthecortex,NCAMmRNAexpression,theexpressionreachedthepeakafteroneday,theresteasinthecortex.ConclusionThesustainedincreaseofNCAMexpressionfolloightplayanimportantroleinneuralrecovery. [KEY)是免疫球蛋白超家族中
3、的一员,在神经元突触塑形,在脑、视神经、嗅神经组织中NCAM保持低水平表达。有证据表明,NCAM能促进控制学习功能脑组织的重塑并显著刺激神经细胞的生长[1]。NCAM参与神经元的黏附与神经生长,与突触结构的维持、模式重建及神经元出芽都有密切的关系。实验证实,NCAM能促进脑损伤后神经细胞的重塑。短暂性全脑缺血后,海马颗粒细胞的NCAM表达增加[2],大脑中动脉缺血再灌注后,在纹状体的室下区也可见到NCAM表达增加[3]。本实验旨在探讨脑损伤后NCAM基因表达的变化规律及其在脑损伤后脑组织重新修复过程中的作用。 1材料与方法 1.1动物和分组成年健康雄性SpragueD
4、ain再灌注2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d、14d组和假手术组,每组4只。假手术组除不插线外,余步骤同实验组。 1.2标本采集和组织切片制备各组大鼠在规定的时间点取材,假手术组于手术后1d取材。大鼠在100g/L水合氯醛麻醉下,经左心室插管给予40g/L多聚甲醛灌注固定后取脑,标本置入40g/L多聚甲醛后固定2h,蒸馏水浸泡4h。常规梯度乙醇脱水,二甲苯透明,浸蜡,包埋,连续冠切片,厚度7μm,粘于多聚赖氨酸处理后的玻片上,温室保存,用于NCAMmRNA原位杂交及其对照实验。 1.3原位杂交检测NCAMmRNA原位杂交试剂盒、DAB显色试剂盒均由武汉博士德
5、生物工程有限公司提供。严格按照试剂盒说明操作,DAB显色30min后水洗,封片。光镜下观察,细胞核或细胞浆出现棕黄色颗粒者为阳性细胞。 1.4统计处理高倍镜下(400倍)每例标本在皮质区和纹状体区随机各取4个不重叠的视野计数阳性细胞,数据以x±s表示,组间比较采用t检验。 2结果 假手术组双侧半球和缺血组非缺血侧脑组织神经细胞NCAMmRNA均有微弱表达。缺血再灌注后缺血侧神经组织NCAMmRNA表达增强,主要位于皮质区及纹状体区,高倍镜下阳性信号位于细胞浆与细胞核内,呈棕黄色。皮质区:缺血再灌注后2h神经细胞出现NCAMmRNA的表达,随着再灌注时间延长,阳性细胞
6、数增多,于12h达高峰,14d后降至假手术组水平。纹状体区:缺血再灌注后2h神经细胞出现NCAMmRNA的表达,随着再灌注时间延长,阳性细胞数增多,着色加深并于1d达高峰,14d后降至假手术组水平。见表1。 表1脑缺血再灌注后皮质及纹状体区NCAMmRNA阳性细胞数(略)与假手术组比较,*t=2.73~11.33,P<0.05 3讨论 NCAM是一个单链的跨膜糖蛋白,根据其糖基部分唾液酸的含量高低可分为两类,NCAM-H和NCAM-L[4]。胚胎发育早期和成年期,NCAM主要以NCAM-L的形式出现,主要分布在神经细胞、胶质细胞、肌肉、内分泌器官、生殖器官、泌
7、尿系统中,也有少数区域如嗅觉系统和齿状回内细胞及部分苔状纤维等以MCAM-H的形式出现[5],这些区域是突触塑形长期存在的区域。NCAM的一个最显著特征是含有以α2~8键相连的多聚唾液酸糖链(PSA),PSA的存在与否会直接或间接调节细胞间的黏附能力。神经生长发育阶段及损伤修复阶段,在NCAM外围形成的带负电荷的PSA表达水平较高,随着发育成熟,PSA水平逐渐下降[6]。成年后仅在嗅神经、哺乳期的下丘脑等有突触形成或生理性塑形的区域内有PSA存在。在成年鼠脑中,内皮质和下丘脑失去联系后,脑齿状回外层PSA表达增加[7]。上述结
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