脑通灵对大鼠脑缺血再灌注baxmrna表达变化的

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1、脑通灵对大鼠脑缺血再灌注BaxmRNA表达变化的【摘要】目的：观察脑通灵对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法：应用动脉栓线法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型，采用BaxmRNA原位杂交技术，观察阳性细胞，经图像分析，并测定脑组织超氧化物歧化酶活性(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果：脑通灵治疗组与模型对照组比较，阳性细胞表达减弱，SOD活性高，MDA含量减低，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：脑通灵通过抑制促凋亡基因BaxmRNA和清除自由基，对脑缺血再灌注损伤有保护作用。【关键词】基因;脑通灵;自由基;脑;缺血再灌注损伤;BaxmRNA;大鼠　　【A

2、BSTRACT】Objective:ToobservetheprotectiveeffectofNaotonglingonischemiareperfusioninjuryinrat.Methods:ThemodifiedBannistermethodakethemodleoffocalcerebralischemiareperfusioninjuryinratstostudytheeffectofNaotonglingonBaxmRNAincerebralcortexinthemodlerats.Results:Naotonglingdecreasedaverage

3、numerialandincreasedaveragegrayvalue,thereageinducedbyfocalcerebralischemiareperfusion.　　【KEYDA、SOD测定试剂盒由南京建成生物研究所生产。　　1.2方法　　1.2.1模型制备及分组　　健康雄性i[2]栓线法建立脑缺血再灌注大鼠模型，大鼠麻醉后，固定大鼠于手术台上，颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉、右侧颈外动脉及其分支，在近颈总动脉分叉约3mm处剪一个小口，用动脉栓线插入颈内动脉约(18±0.5)mm，遇轻微阻力后，结扎颈内动脉，再灌注时只需将栓线抽出。动物清醒后至少具备同侧H

4、orner征，提尾时对侧前肢内收屈曲者为造模成功。缺血90min后，拔出栓线再灌注120min。脑通灵治疗组分别于梗塞前及再灌注前5min灌胃给药2mL;模型对照组腹腔注射等量生理盐水;正常对照组仅手术暴露血管。　　1.2.2标本采集和处理　　各组均断头取脑，在脑的视交叉后和下丘脑后横断(冠状面)将脑分成前、中、后三部分，在前、中切面上，取1.5mm厚脑片用于光镜切片。　　1.2.3脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测量将大鼠断头取脑，去离子水冲静表面，取视交叉与脚间窝间切片约200～300mg，用SOD、MDA试剂盒和721分光光度计测定。　　1.2.

5、4BaxmRNA原位杂交具体操作按说明书进行。　　1.2.5图像分析　　利用北航提供的灰度及数密度分析软件,对原位杂交后切片进行计算机图像分析,所有切片均在同一放大倍数(×400)下分析,以胞质着色深度代表mRNA含量的变化,灰度值越小,说明其阳性细胞多(即mRNA含量高),反之灰度值大则说明其阳性细胞少(mRNA含量低)。　　1.3中药方剂组成、制备及给药方法　　(1)脑通灵液方剂组成：黄芪、当归、地龙、川芎、桂枝、通草等。(2)制备：常规煎煮两次，再将两煎的上清液混合，文火煎浓缩至70mL。　　1.4统计学分析　　实验数据用(x±s)表示,采用SPSS10.0软件

6、进行统计学分析。将数据输入先进行单因素方差齐性检验,若方差齐(本组资料全部方差齐)。采用方差分析,组间比较采用q检验，P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　表1脑缺血再灌注后大脑皮质MDA、SOD表达注：与模型对照组相比*P<0.01表2脑缺血再灌注损伤后大脑皮质BaxmRNA的表达(阳性细胞密度)(×103/μm3)(x±s)注：与正常对照组相比*P<0.05;与模型对照组相比#P<0.05表3脑缺血再灌注损伤后大脑皮质BaxmRNA的表达(平均灰度值注：与正常对照组相比*P<0.01;与模型对照组相比#P<0.05　　

7、3讨论　　缺血性脑血管病严重危害人类身体健康,其发病机理错综复杂,在临床上初次卒中的病例占中、大脑中动脉阻塞很大比例。本实验制作脑缺血再灌注动物模型,同时缺血90min后再灌注,此模型模拟的病理过程与临床卒中很相似。Bax基因在细胞内膜、细胞浆和细胞核均有分布[3]，Bax基因在凋亡发生过程中，起重要枢纽作用[4]。一般说来,在胞质中Bax以单体形式存在,然而在细胞发生凋亡时,与线粒体关联的Bax既可能以无活性的单体形式存在，也可以与线粒体膜结合的大分子量的活性复合物形式存在。当Bax同源二聚体形成,便促进细胞凋亡。自由基攻击细胞膜，改变细胞膜的通透