腺病毒介导胰岛素样生长因子1基因对糖尿病早期胰岛β细胞的保护作用

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1、青岛大学硕士学位论文腺病毒介导胰岛素样生长因子1基因对糖尿病早期胰岛β细胞的保护作用姓名：宋青申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：李堂20120603腺病毒介导胰岛素样生长因子1基因对糖尿病早期胰岛13细胞的保护作用摘要■⋯目的观察腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子一1(rlGF一1)基因对环磷酰胺(cP)诱导的非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病早期胰岛B细胞损伤的保护作用。方法复苏并培养293细胞，在293细胞中扩增携有dGF．1基因的重组腺病毒(Ad-rlGF．11。4-5周龄雌性NOD鼠46只，随机分为：①空白对照组，②糖尿病对照(Did)组，③

2、腺病毒空载体(Ad．eGFP)对照组，(垄)Ad-rlGF-1组，适应喂养一周后，②一④组均给予CP腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型，200mg／kg，每2周1次，共2次。第2次CP注射后第3天、第7天及以后每周同一时间测鼠尾静脉血糖，连续2次血糖高于16．7mmol／L视为糖尿病早期成模。成模后③组给予含Ad．eGFP的重组腺病毒液0．1mL腹腔注射，④组给予含Ad-rlGF-1的重组腺病毒液0．1IIlL腹腔注射，①组不做任何处理。所有小鼠自由饮食，每周测定体质量、血糖，成模3周后处死小鼠，立即取出胰腺，中性福尔马林固定，石蜡包埋固定做病理切片及免疫组化观

3、察胰腺炎症浸润程度和rIGF—l局部表达程度；留取小鼠血液标本，离心取血清，ELSIA法测定血清C肽、IFN—Y及IL-4水平。‘、一．结果与DM组、Ad-eGFP组相比，Ad-rlGF-1组小鼠平均血糖水平、体质量变化无显著差别；胰腺切片苏木素伊红(HE)染色显示胰腺炎症浸润程度无显著差别；免疫组化显示rlGF．1在Ad-rlGF-1组胰岛局部高表达；ELISA法测得Ad—rlGF一1组与DM组、Ad．eGFP组血清C肽水平、IFN-?、IL4水平无明显差别。结论r-IGF．1基因对环磷酰胺诱导的NoD小鼠l型糖尿病早期胰岛13细胞的保护效一一果不明显

4、。一硕士研究生：宋青(儿内科学)指导教师：李堂教授关键词：胰岛素样生长因子一1；腺病毒；NOD鼠；1型糖尿病；基因治疗AbstractobjectiveToinvestigatetheprotectiveroleofadenovirusvectormediatedrIGF一1oncyclophosphamidc(CP)一inducedearlydiabetesmodelsofnonobesediabetic(NOD)mice．MethodsInfecttheHEK293cellswitllrecombinantadenovirusencodingdGF-

5、1genetoamplificatethevirus．FourtysixfemaleNODmiceagcdfromfourtofiveweekswererandomlydividedintofourgroups．Group1isnormalcontrolgroupwithoutspecialdisposal；Group2-4receivedintrapedtonealinjectionincyclophosphamide(CP)(200mg／kg,bi—weekly,twotimes)，inordertoinducediabeticmellitusmod

6、els．Group2isdiabetesmellituscontrol90up．BloodglycemiaWCl'emeasuredatthesametime，threedays，sevendays，andonceaweekafterinjectionofCP．Higherthan。16．7mmol／Lisregardedasearlydiabetesmodels．Group3receivedtheintraperitonealinjectionofadenovirusvectormediatedemptygreenfluorescenceprotein

7、(Ad·cGFP)．Group4receivedintraperitonealinjectionofadenovirusvectormediatedrlGF·1gene(0．1mL)byintraperitonealinjection。Later,Micewerefedandlibitum谢也astandarddiet．Whcightandglycemiaweremeasuredonceaweek．Threeweekslater,allmicewereexecutedandpanereatawerefixedformore24hours，embedded

8、inparaffin,andsectioned．Weobservedthedeg