腺病毒介导的白细胞介素10基因对nod鼠1型糖尿病早期胰岛β细胞的保护作用

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1、青岛大学硕士学位论文腺病毒介导的白细胞介素10基因对NOD鼠1型糖尿病早期胰岛β细胞的保护作用姓名：张芳萍申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：李堂20120603腺病毒介导的白细胞介素10基因对NOD鼠1型糖尿病早期胰岛13细胞的保护作用捅要目的观察腺病毒介导白细胞介素10(rlL-lO)基因对NOD鼠l型糖尿病早期胰岛13细胞的保护作用。方法复苏并培养293细胞，并扩增携带有白细胞介素10基因的腺病毒(Ad-dL-]0)和含有空载体的腺病毒(Ad-eGFP)，4-5周龄的清洁级NOD小鼠(体重20．

2、239)46只，随机分为：对照组：①空白对照组10只，②糖尿病对照组12只；实验组：③腹腔注射Ad-rlL-10组12只，④腹腔注射Ad—eGFP组12只。①组不做任何处理，②．④组于自由喂养1周后第1、14天给予环磷酰胺200mg／kg腹腔注射促发糖尿病，成模后②不做任何处理，③给予腹腔注射含Ad-rlL-10的病毒液0．1ml，④给予腹腔注射含Ad-eGFP病毒液0．1ml。所有小鼠自由饮食，每周测定体重、血糖，成模3周后处死小鼠，立即取出胰腺，中性福尔马林固定，石蜡包埋固定做病理切片HE染色及免疫组

3、化观察胰腺炎症浸润程度和IL．10局部表达程度，留取小鼠血液标本，离心取血清，测定血清刀阶『-％IL-4，IL-IO和C肽水平。结果①组与②、③、④组相比血糖水平及体重变化有明显差异，但②、◎、④组组间比较差异无统计学意义；胰腺切片苏木素伊红染色(HE染色)示②、③、④组组间胰岛炎无明显差异，免疫组化示③组rlL．10表达水平明显高于①、②、④组；ELISA法测IFN-7、IL-4、IL-10和C肽表达水平示②、③、④组组间无明显差异。结论rlL-lO基因对NOD鼠1型糖尿病早期胰岛13细胞无明显保护作用

4、。硕士研究生：张芳萍(儿科学)指导教师：李堂教授关键词：白细胞介素10；腺病毒；NOD鼠；1型糖尿病；基因治疗I剃?,m0硼8舢黼8帆3帆811l＼2瓯YTheProtectiveRoleofAdenovirusVectorMediatedInterleukin10(rlL-Io)GeneOilType1DiabetesMellitusofNODmiceAbstractObjectiveToinvestigatetheprotectiveroleofadenovirusvectormediatedinte

5、rleukinlO(rIL-lO)gene011type1diabetesmellitusofNODmice．MethodsCulture293celltoamplifyadenovims．Forty-sixNODmiceagedfrom4to5weekswererandomlydividedintofourgroups．Group1isnormalcontrolgroupwith10micewithoutspecialdisposal．Groups2to4whichcontains12miceineac

6、hofthemreceivedintraperitonealinjectionofCyclophosphamide200m眺g·d011the1髓and14也dayinordertoinducetypeldiabetesmellitus．RandombloodglycemiaweremeasuredafterinjectionofCyclophosphamide，hi曲erthan16．7mmol／Lisregardedasearlydiabetesmellitus．Group3receivedintra

7、peritonealinjectionofadenovirusvector，mediatedrIL广lOgene0．1m1．Group4receivedintraperitonealinjectionofadenovi^svectormediatedeGFP．Threeweekslater,allmicewereexecutedandfixedpancrestainformalinfor12-24hours，thenembeddedinparaffin，andsectioned．Weobservedthe

8、incidenceofdiabeticmellitus,thedegreeofinsulitisandtheexpressionoflL-10detectedbyimmunohistochemistry．DetectedIL-10，IL4，INF-Y，C-peptidebyenzymelinkedimmunosorbentassay．ResultsComparedwithgroup1，averagebloodglucosele