胰岛素样生长因子对早期胚胎发育的保护作用论文

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1、胰岛素样生长因子对早期胚胎发育的保护作用论文张米娜，于月成，黄侃，宋晖，张红菊，王晓红【关键词】早孕Protectiveeffectofinsulinlikegrootherserum,andtoexploretheirrelationshipbryogenesisofearlypregnancy.METHODS:ExpressionsofIGFIandIGFIIinedbyimmunohistochemicalSPmethod;themRNAexpressionsofIGFIandIGFIIIGFIandIGFIIlevelsinedbyenzymelinkedimmuno

2、sorbentassay(ELISA).RESULTS:TheexpressionsofIGFIandIGFIIbothproteinandmRNAalvillusanddeciduaofpregnancyterminationthanthoseofnormalvillusanddeciduaofnormalpregnancy（P0.01）.SerumlevelsofIGFIandIGFIIinnormalpregnancyenuchhigherthanthoseofabnormalpregnancyen（P0.01）.CONCLUSION:IGFIandIGFIImaypl

3、ayimportantrolesintheregulationoffetalgromaybethekeyfactorcontributingtotheembryogenesisterminationofearlypregnancy.SoIGFIandIGFIIcanserveas2parametersinexaminingthefetalsafety.【Keyination;deciduas【摘要】目的：探讨胰岛素样生长因子I和II（IGFI和II）在正常胚胎发育及早期胚胎发育终止绒毛及蜕膜组织中的表达及其在母体血中水平的改变与胚胎发育的关系.方法：分别采用免疫组织化学SP法

4、和原位杂交法检测正常胚胎发育绒毛及早期胚胎发育终止绒毛中IGFI和蜕膜中IGFII蛋白的表达以及IGFImRNA和蜕膜中IGFIImRNA的表达；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测正常妊娠及早期胚胎发育终止孕妇血中IGFI和II水平的变化.结果：免疫组化结果显示，正常妊娠绒毛中IGFI和蜕膜中IGFII的表达明显高于胚胎发育终止组（P＜0.01）；原位杂交结果显示，正常妊娠组绒毛中IGFI和蜕膜中IGFIImRNA的表达明显高于胚胎发育终止组（P＜0.01）；正常妊娠组母血中IGFI和II水平显著高于胚胎发育终止组（P＜0.01）.结论：IGFI和II在绒毛组织中的表达及

5、母血中的水平的升高对早期胚胎发育有重要的保护作用.freelL，不抗凝，离心后取血清，-20℃冷冻冰箱保存.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定，操作方法严格按照试剂盒说明进行.反应终止后在EL312e型酶标仪测吸光度值，每份标本均测双份，取平均值，根据标准曲线算出IGFI和II含量.1.2.2绒毛组织中IGFI和蜕膜组织中IGFII的表达采用免疫组织化学SP染色法检测.将绒毛组织和蜕膜组织经40g/L多聚甲醛固定后，常规制作4μm石蜡切片，一抗为兔抗人IGFI和II抗体（1∶100）,二抗为HRP标记的羊抗兔IgG，以DAB显色.具体步骤按说明书进行.对照设置：免疫组化染

6、色中分别以已知IGFI阳性的肝癌和IGFII阳性的乳腺癌作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照.检测结果的判定：以胞质中出现黄色和棕黄色颗粒为阳性信号.1.2.3绒毛组织中IGFImRNA和蜕膜组织中IGFIImRNA水平的表达采用原位杂交法检测.将石蜡切片常规脱蜡至水，加30mL/LH2O2室温处理10min，用DEPC水洗2×5min.加胃蛋白酶于37℃消化30min，以0.5mol/LPBS洗3×5min，于40℃预杂交3h.用滤纸吸去预杂交液，然后杂交过夜，最后用DAB显色.IGFI和IImRNA探针为地高辛标记的原位杂交液，一抗为HRP标记的鼠抗地高辛IgG.对

7、照设置：以试剂盒内配置的阳性切片（肝癌）作为阳性对照，以不加含有标记探针的原位杂交液作为阴性对照.检测结果的判定：以胞浆中出现黄色和棕黄色颗粒为阳性信号.1.2.4图像分析用MIAS300型图像分析仪，输入装置为OlympusBH2显微镜和台湾产MTV180型CCD摄像头，显微放大倍数400倍，普通光源照明.将免疫组化染色和原位杂交染色切片显微镜下观察视野输入图像分析仪的高分辨图像监视器上，对阳性产物相对含量进行测定.在光镜下（×100）每例随机取样测5个蜕膜断面，10个单位面积，每组共测50个单位面积